Jornal de Farmacogenômica e Farmacoproteômica

Abstrato

Seleção e caracterização bioquímica de novas moléculas leishmanicidas por rastreios virtuais e bioquímicos visando o fator de iniciação da tradução eucariótica 4A de Leishmania

Yosser Zina Abdelkrim

A identificação de novas moléculas pequenas e ativas para o tratamento das leishmanioses constitui uma prioridade de investigação. Aqui, expandimos investigações in silico anteriores e rastreios virtuais de pequenas moléculas visando o fator de iniciação 4A de Leishmania infantum (LieIF) como um potencial alvo de fármaco. LieIF pertence à família DEAD-box de helicases de RNA. As proteínas DEAD-box contêm uma estrutura central altamente conservada com formato de haltere contendo dois domínios ligados com homologia estrutural com a da
proteína A recombinante (RecA). Esta estrutura central confere uma afinidade de ligação ao RNA dependente de ATP, uma atividade ATPase dependente de RNA e uma atividade de desenrolamento de RNA dependente de ATP. Utilizámos a atividade ATPase para estabelecer um ensaio colorimétrico em placas de microtitulação para rastrear moléculas que inibem o LieIF. Selecionámos centenas de moléculas previamente identificadas por rastreios virtuais quanto à sua capacidade de se ligarem a locais no LieIF que eram importantes para a atividade enzimática. Descobrimos um inibidor interessante: o 6-α/β-aminocolestanol com
um valor de IC50 de 150 ± 15 μM para 1 μM de LieIF. Este composto também inibe a atividade da RNA helicase do LieIF. Os ensaios de helicase e as experiências de competição de ATPase com os domínios individuais do tipo RecA e outras proteínas indicam que existem múltiplos locais de ligação no LieIF e que o local de ligação primário está no domínio 1 envolvendo motivos conservados de ligação ao ARN. Dois em cada dez análogos químicos identificados do 6-α/β-aminocolestanol (6-α-aminocolestanol e 6-cetocolestanol) apresentaram efeitos inibidores na atividade ATPase do LieIF. Efeitos inibidores semelhantes foram observados com o eIF4A de mamíferos, mas com perfis de reacção diferentes. Todas as três moléculas apresentaram atividade anti-leishmania contra os promastigotas e amastigotas dos parasitas L. infantum, e apresentaram toxicidade não significativa para os macrófagos. Este estudo constitui um primeiro passo para a validação do LieIF como alvo de fármaco. Demonstra diferenças bioquímicas entre as proteínas eIF4A de Leishmania e de mamíferos, principalmente em ensaios de ATPase que mostram que a rocaglamida afeta as duas proteínas de forma diferente. Para concluir, este trabalho entrega uma molécula leishmanicida promissora: o 6-aminocolestanol com um valor de IC50 inferior a 1 μM em amastigotas intracelulares, com pouca toxicidade e com um índice de seletividade superior a 20. O 6-aminocolestanol constitui uma molécula anti-Leishmania promissora que merece investigação adicional.