Jornal de Farmacogenômica e Farmacoproteômica

Abstrato

Escada caseira de ADN de base de 100 pares baseada no plasmídeo bacteriano pMAL-C2X

Firuzeh Badreh1, Khodakaram Jahanbin2, Ali Khodadadi2, Ali Khorasani Zadeh2, Moosa Sharifat2, Milad Khayati2, Mohammad Rashno2,3

Enquadramento: A maioria dos resultados da investigação em biologia molecular requer marcadores como as escadas de ADN para detetar e quantificar o comprimento dos fragmentos de ácido nucleico por eletroforese em tarefas de rotina.

Métodos: Neste estudo, reportamos um método para preparar uma escada de ADN de 100 pares de bases baseada na técnica de PCR. O plasmídeo bacteriano pMAL-C2X foi utilizado como ADN molde na PCR. Os produtos de PCR foram extraídos com fenol/clorofórmio, precipitados com etanol e misturados proporcionalmente.

Resultados: Por fim, foi desenhado com sucesso um conjunto de 7 primers (5 reversos e 2 diretos). Os fragmentos de PCR amplificados foram quantificados por nanodrop e o tamanho das bandas foi estimado por electroforese em gel juntamente com uma escada comercial de 100 pb em co-migração em gel de agarose a 1,5%. Os resultados indicaram que as bandas claras e nítidas de 100 pb-1000 pb foram geradas com sucesso por uma reação de PCR.

Conclusão: O nosso produto caseiro é um produto competitivo no mercado comercial e pode ser preparado com um método simples, barato e com baixa probabilidade de banda inespecífica.