Jornal de Patologia Vegetal e Microbiologia

Abstrato

Detecção visual do vírus Curly Top pela amplificação isotérmica mediada por loop colorimétrico

Mohammad Amin Almasi, Mehdi Aghapour-ojaghkandi e Saeedeh Aghaei

Curly Top Virus (CTV) em beterraba sacarina, pertencente à família Geminiviridae, gênio Curtovirus é um problema considerável em áreas semiáridas do Irã e outras partes semiáridas do mundo. Existem vários métodos de diagnóstico para detectar CTV, mas essas técnicas levam muito tempo, de 3 horas a dois dias, exigindo ferramentas sofisticadas. O objetivo deste estudo, pela primeira vez, foi reduzir o tempo necessário para detectar CTV em beterraba sacarina, usando a técnica de amplificação isotérmica mediada por loop colorimétrico (LAMP), exigindo apenas um banho de água comum ou termobloco. O DNA foi extraído de tecidos foliares naturalmente infectados. As amostras foram testadas para a presença de espécies de Curtovirus por reações de PCR e LAMP para amplificar o gene da proteína associada à replicação (rep) usando primers de espécies. O LAMP foi otimizado para amplificar o DNA do CTV em condições isotérmicas por incubação a 63 °C por 30 min. Os produtos LAMP foram detectados visualmente usando os diferentes corantes. Os produtos de amplificação LAMP tinham uma aparência de escada quando eletroforizados em um gel de agarose e também resultados positivos usando os diferentes corantes foram uma mudança de cor. Os resultados confirmaram que o LAMP com diferentes corantes fornece um ensaio rápido e seguro para detecção de CTV em beterraba. Como com outros métodos moleculares, equipar laboratórios com um termociclador ou sistemas detectores caros é inevitável, este ensaio foi considerado um método molecular simples e econômico que tem o potencial de substituir outros diagnósticos em laboratórios primários sem a necessidade de equipamentos caros ou técnicas especializadas. Ele também pode ser considerado como um sistema de detecção viral alternativo confiável em investigações posteriores.