Revista de Farmacologia Clínica e Experimental

Abstrato

A verticilina A inibe o crescimento do leiomiossarcoma e do tumor maligno da bainha do nervo periférico através da indução de apoptose

Zewdu A, Lopez G, Braggio D, Kenny C, Constantino D, Bid HK, Batte K, Iwenofu OH, Oberlies NH, Pearce CJ, Strohecker AM, Lev D, Pollock RE *

Objectivo: A heterogeneidade do sarcoma de tecidos moles (STS) representa um grande desafio para o desenvolvimento de terapêutica eficaz. Compostos por mais de 50 subtipos histológicos diferentes de várias etiologias, os subconjuntos STS são ainda caracterizados como cariotipicamente simples ou complexos. Devido ao número de anomalias genéticas associadas a STS geneticamente complexas, o desenvolvimento de terapias que demonstrem potência contra este grupo de STS é especialmente desafiante e, ainda assim, extremamente necessário. A verticilina A é um produto natural de pequena molécula com atividade anticancerígena demonstrada; no entanto, a eficácia deste agente nunca foi avaliada em STS. Assim sendo, o objetivo deste estudo foi explorar a verticilina A como um potencial terapêutico STS.

Métodos: Realizamos análises de sobrevivência (MTS) e clonogénicas para medir o impacto deste agente na viabilidade e capacidade de formação de colónias de linhagens celulares STS cariotipicamente complexas: tumor maligno da bainha do nervo periférico (MPNST) e leiomiossarcoma (LMS). Os efeitos in vitro da verticilina A na apoptose foram investigados através da análise de citometria de fluxo de anexina V / PI e medindo a atividade da caspase 3/7 clivada marcada com fluorescência. O impacto na progressão do ciclo celular foi avaliado através da medição citométrica da intercalação de iodeto de propídio. Os estudos in vivo foram realizados utilizando modelos de xenoenxertos MPNST. Os tumores foram processados ​​e analisados ​​por imunohistoquímica (IHC) para efeitos da verticilina A no crescimento (Ki67) e apoptose (caspase 3 clivada).

Resultados: O tratamento com verticilina A resultou numa diminuição do crescimento do STS e no aumento dos níveis apoptóticos após 24 horas. A verticilina A 100 nM induziu uma anulação significativa do crescimento celular após 24 h (redução de 96,7, 88,7, 72,7, 57 e 39,7% em LMS1, S462, ST88, SKLMS1 e MPNST724, respetivamente). Não observámos qualquer paragem no ciclo celular, elevação da anexina e um aumento de quase duas vezes na atividade da caspase 3/7 clivada em todas as linhas celulares MPNST e LMS. As células normais de controlo de Schwann humano (HSC) e do músculo liso aórtico (HASMC) apresentaram maior tolerância ao tratamento com verticilina A em comparação com as linhas celulares de sarcoma, embora tenha sido observada toxicidade nas HSC na dose de tratamento mais elevada. Os estudos in vivo refletiram os resultados in vitro: no dia 11, o tamanho do tumor foi significativamente reduzido nos modelos de xenoenxerto MPNST724 com tratamento de 0,25 e 0,5 mg/kg de verticilina A. Além disso, a avaliação IHQ dos tumores demonstrou um aumento da caspase 3 clivada e uma diminuição da proliferação (Ki67 ) após tratamento com verticilina A.

Conclusão: O avanço no tratamento da STS cariotipicamente complexa é confundido pelo elevado nível de anomalias genéticas encontradas nestas doenças. Consequentemente, a identificação e investigação de novas terapêuticas é muito necessária. Os nossos dados sugerem que a verticilina A inibe seletivamente o crescimento de MPNST e LMS através da indução de apoptose, exibindo efeitos mínimos a moderados nas células normais, apontando a verticilina A como um potencial tratamento para MPNST e LMS, após validação pré-clínica adicional.