Jornal de pesquisa e terapia com células-tronco

Abstrato

Regulação transcricional do NANOG humano por promotores alternativos em células estaminais embrionárias

Satyabrata Das, Snehalata Jena, Eun-Mi Kim, Nicholas Zavazava e Dana N. Levasseur

Introdução : O potencial das células estaminais pluripotentes para serem utilizadas na terapia celular depende de uma compreensão abrangente dos mecanismos moleculares subjacentes à sua capacidade única de especificar células de todas as camadas germinativas enquanto estas sofrem uma auto-renovação ilimitada. O splicing alternativo e a selecção de promotores alternativos contribuem para este mecanismo, aumentando o número de transcritos gerados a partir de um único locus génico e permitindo assim a expressão de novas variantes proteicas que podem diferir no seu papel biológico. O fator de transcrição NANOG contendo homeodomínio desempenha um papel crítico na manutenção da pluripotência das células estaminais embrionárias (ESC). É, portanto, necessária uma compreensão completa da regulação transcricional do locus NANOG nas CES.

Métodos: Foram identificadas pegadas regulatórias e níveis de transcrição para NANOG em células estaminais embrionárias humanas a partir de dados obtidos através de metodologias de sequenciação de alto rendimento. A PCR quantitativa em tempo real após transcrição reversa de CES humanos extraídos de RNA foi utilizada para validar a expressão de transcritos de uma região que se estende para montante do início transcricional NANOG anotado. A identificação e caracterização do promotor foram realizadas através de ensaios de repórter do promotor e de deslocamento de mobilidade electroforética.

Resultados: A marcação transcricionalmente ativa da cromatina e o enriquecimento do local de ligação do fator de transcrição foram
observados numa região a montante do local de início da transcrição conhecido em NANOG. A expressão de novos transcritos desta região transcricionalmente ativa confirmou a existência de splicing alternativo NANOG em CES humanos. Identificámos um promotor NANOG alternativo de força significativa nesta região a montante. Verificámos também que o NANOG autorregula a sua expressão ligando-se ao seu promotor proximal a jusante.

Conclusão: O nosso estudo revela nova expressão de transcritos de NANOG em CES humanos, indicando que
o splicing alternativo aumenta a diversidade de transcritos originados a partir do locus NANOG e que estes transcritos são expressos por um promotor alternativo. O splicing alternativo e a utilização de promotores alternativos colaboram para regular o NANOG, possibilitando a sua função na manutenção de CES.