Jornal de Bacteriologia e Parasitologia

Abstrato

Ativação transcricional por uma sequência semelhante a URE4 no promotor do núcleo do gene EhPgp1

ME Ramírez, DG Pérez, E Náder e C Gómez

EhPgp1 ​​é um dos genes de resistência a múltiplas drogas expressos em trofozoítos resistentes a drogas de Entamoeba histolytica. Estudos anteriores em nosso laboratório demonstraram que dois sítios C/EBP participam da ativação transcricional deste gene. No entanto, há outra região relevante que também governa a regulação da expressão de EhPgp1 ​​no clone C2. Neste relatório, fornecemos evidências de que a transcrição do gene EhPgp1 ​​é pelo menos parcialmente regulada pelas sequências repetidas R9 de ação cis e pela proteína EhEBP1. A análise estrutural da região de -234 a -197 pb mostra a presença de duas sequências repetidas de 9 pb [R9(1) e R9(2)] localizadas em -226 a -203 pb. A análise de deleções e mutações dos motivos R9 reduziu significativamente a atividade do promotor em trofozoítos do clone C2. Os experimentos EMSA revelaram a ligação específica de proteínas nucleares de E. histolytica à sequência R9. Enquanto ensaios de competição mostraram que a presença de mais de uma sequência R9 é necessária para uma forte interação DNA-proteína. Além disso, experimentos de Western blot com proteínas parcialmente purificadas interagindo com o motivo R9 e anticorpos contra EhEBP1 reconheceram uma proteína de 28 kDa. Curiosamente, esse anticorpo em ensaios de supershift impediu a formação de interações DNA-proteína das sequências R9 e proteínas nucleares da ameba, indicando que uma das proteínas que interagem com o elemento R9 é semelhante a EhEBP1. Concluindo, demonstramos que os motivos R9 são reconhecidos por uma proteína EhEBP1 e ativam a expressão do gene EhPgp1.