Jornal de pesquisa e terapia com células-tronco

Abstrato

Transativação da expressão do gene alvo por SALL4B recombinante: um marcador de células estaminais pluripotentes

Mengru Yuan, Yun Wang, Zhihua Ren, Wei Dai e Yongping Jiang

O SALL4 é um importante fator de transcrição que suporta a expansão das células estaminais hematopoiéticas. A expressão de SALL4 está também desregulada em vários tipos de leucemia . Estudos recentes revelam que a SALL4B, uma importante isoforma da SALL4, é fortemente modificada por mecanismos pós-traducionais e estas modificações são críticas para a sua estabilidade, localização subcelular e atividades transcricionais. Dada a importância do SALL4B no apoio à auto-renovação e expansão das células estaminais, otimizámos um processo de expressão e purificação em larga escala para obter o SALL4B utilizando o sistema vetorial de expressão de baculovírus. O TAT-SALL4B recombinante foi eficientemente purificado por cromatografia de afinidade com níquel em condições nativas. A imunotransferência confirmou que o SALL4B recombinante foi altamente expresso e purificado. Como primeiro passo para testar a atividade biológica do TAT-SALL4B purificado, investigámos se o TATSALL4B, suplementado diretamente ao meio de cultura, era capaz de entrar nas células através do processo de transdução proteica. A microscopia fluorescente revelou que o TAT-SALL4B recombinante se localizou especificamente no núcleo de uma forma dependente da concentração e do tempo. Os ensaios do gene repórter mostraram que a proteína TAT-SALL4B purificada ativou o promotor do gene OCT4, indicando que o SALL4B recombinante era transcricionalmente ativo in vivo. Combinados, os nossos resultados sugerem que o TAT-SALL4B pode fornecer um fator promissor para apoiar a expansão ex vivo de células estaminais hematopoiéticas .