Bioquímica e Bioquímica Analítica

Abstrato

Estudos de curso temporal sobre o impacto da exposição a baixas temperaturas nos níveis de proteínas e enzimas em larvas de quinto instar do bicho-da-seda Eri, Philosamia ricini (Lepidoptera: satuniidae)

Anita Singh, Vivek Kumar Gupta, Nikhat Jamal Siddiqi, Shaily Tiwari, Anita Gopesh e Bechan Sharma

A lactato desidrogenase (LDH; EC 1.1.1.27) e a malato desidrogenase (MDH; EC 1.1.1.37) são as enzimas envolvidas no metabolismo energético do bicho-da-seda Eri, Philosamia ricini. No entanto, não foi relatado nenhum estudo anterior sobre o efeito da exposição a baixas temperaturas nos seus níveis em diferentes tecidos do bicho-da-seda Eri. O presente estudo teve como objectivo avaliar os efeitos da exposição a baixas temperaturas (~ 10 ° C) de P. ricini de 5º instar nos níveis de proteínas e enzimas do metabolismo energético de três tecidos principais (hemolinfa, glândula da seda e corpo gordo) . As larvas do bicho-da-seda Eri, criadas em folhas frescas de mamona (Ricinus communis), foram divididas em 4 grupos: um grupo controlo criado a 25 ± 2°C e três grupos experimentais criados a 10 ± 1°C contendo 50 larvas em cada um, por durações variadas (2, 4 e 7 dias). O extracto livre de células foi preparado centrifugando o homogeneizado de tecido a 9000 g e utilizado para as estimativas bioquímicas (conteúdo proteico total, actividades de lactato desidrogenase e malato desidrogenase). Para a análise isoenzimática, um outro conjunto de homogenatos (20% p/v) foi preparado em tampão (Tris HCl 0,2 M, pH 7,0) contendo sacarose 0,2 M e EDTA 10 mM, e analisado por PAGE nativo seguido de coloração da atividade. As atividades da lactato desidrogenase e da malato desidrogenase apresentaram uma diminuição significativa da hemolinfa, enquanto que nos corpos gordos ambas as enzimas apresentaram uma atividade aumentada. Na glândula da seda, a atividade da lactato desidrogenase diminuiu uniformemente, enquanto a atividade da malato desidrogenase aumentou em todos os tempos de exposição. A análise isoenzimática revelou perturbações significativas nos seus perfis de expressão. A exposição a baixas temperaturas resultou na acumulação de conteúdo proteico na hemolinfa e na depleção das glândulas da seda e dos tecidos adiposos do organismo. Os corpos gordos surgiram como o principal órgão produtor de energia nesta condição. A lactato desidrogenase e a malato desidrogenase apresentaram a presença de apenas uma isoenzima em todos os tecidos testados. O comportamento isoenzimático da lactato desidrogenase e da malato desidrogenase em relação à baixa temperatura variou nos diferentes tecidos. Estes resultados sugerem que alterações na expressão e funções destas enzimas podem estar associadas à aclimatação das larvas a baixas temperaturas.