Pharmaceutica Analytica Acta

Abstrato

Análise estrutural da ciclofilina de Moniliophthora perniciosa e atividade inibitória da ciclosporina na germinação e crescimento de fungos

Paulo S Monzani, Humberto M Pereira, Karina P Gramacho, Fátima C Alvim, Flávio V Meirelles, Glaucius Oliva e Júlio CM Cascardo

Moniliophthora perniciosa é o agente causal da doença vassoura-de-bruxa do cacau. As ciclofilinas têm sido implicadas em uma ampla variedade de processos celulares, incluindo a resposta a estresses ambientais, controle do ciclo celular, regulação da sinalização de cálcio e controle transcricional. O envolvimento das ciclofilinas na patogenicidade foi descrito tanto em fungos patogênicos para animais quanto para plantas. Em leveduras, a calcineurina e a ciclofilina estão envolvidas na morfogênese e virulência fúngica. Há evidências de que a ciclofilina interage com a calcineurina na ausência de ciclosporina A (CsA), e foi proposto que a atividade da CsA atua na interação regulatória entre ciclofilina e calcineurina; também, ações fungistáticas ou fungicidas foram observadas nessa atividade. O gene da ciclofilina de M. perniciosa do cDNA do corpo de frutificação no vetor pET28a foi clonado e a proteína foi expressa, purificada e cristalizada. As estruturas de ciclofilina nas formas apo e ligada com CsA foram resolvidas a 1,85 e 1,47 ºC, respectivamente. A comparação de estruturas de diferentes organismos indica estruturas conservadas de ciclofilinas. Pequenas diferenças foram encontradas nas formas apo e ligada; portanto, segue-se que as estruturas de ciclofilina não têm modificações acentuadas na presença do ligante. No entanto, várias ligações de hidrogênio entre cadeias laterais de aminoácidos e moléculas de água são quebradas no sítio do ligante quando CsA é ligado. Os ensaios de esporos de germinação usando CsA mostraram uma baixa atividade inibitória na germinação, mas alta inibição do crescimento do tubo germinativo. Esses resultados mostram que a ciclofilina desempenha um papel importante no processo de crescimento, mas não na germinação, sugerindo, portanto, que a ciclofilina é um alvo potencial para a ação fungistática contra M. perniciosa.