Bioquímica e Bioquímica Analítica

Abstrato

Caminho de desdobramento lento da Tk-RNase H2 hipertermofílica examinada por proteólise de pulso utilizando proteínas mutantes

Kanako Shima, Ai Nagao, Jun Okada, Satoshi Sano e Kazufumi Takano

O desdobramento da ribonuclease H2 do arqueão hipertermófilo Thermococcus kodakarensis (Tk-RNase H2) é notavelmente lento. Em trabalhos anteriores, os intermediários de desdobramento Tk-RNase H2, estados IA-, IB-, IC- e ID, foram observados por análise de proteólise de pulso a 25 ° C, onde os estados IB e IC são as principais formas no lento processo de desdobramento desta proteína. Aqui, examinámos a via de desdobramento lento da Tk-RNase H2 por proteólise de pulso utilizando mutantes. Para a variante estabilizada, D7N, o tempo de vida dos estados IA e IB diminuiu, mas o estado IC apareceu mais cedo a 25°C, indicando a estabilização do estado IC. Os estados IA e IB não foram observados na variante desestabilizada, L33A, a 25°C, enquanto que no tipo selvagem estes dois estados desapareceram a 50°C. Os nossos resultados sugerem que a temperaturas mais elevadas o estado IC é o verdadeiro estado nativo da Tk-RNase H2, enquanto os estados nativo IA e IB a 25 ° C são formas artificiais a temperaturas mais baixas.