Jornal de Bioequivalência e Biodisponibilidade

Abstrato

Quantificação simultânea de vitamina D-2, vitamina D-3 e seus 25-hidroximetabólitos em plasma humano por cromatografia líquida de alta eficiência

Syed N Alvi, Ahmed Yusuf e Muhammad M Hammami

Um método simples e confiável de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC) para determinação simultânea de vitamina D-2 (VD-2), vitamina D-3 (VD-3), 25-hidroxivitamina D-2 [25 (OH) VD-2] e 25-hidroxivitamina D-3 [25 (OH) VD-3] em plasma humano foi desenvolvido e validado. Amostras de plasma foram desproteinizadas com uma mistura de metanol e 2-proponol e extraídas com hexano. Após a evaporação, o resíduo foi dissolvido em metanol:água (9,6:0,4, v/v), centrifugado e, em seguida, a solução límpida foi injetada na coluna Zorbax C18. A fase móvel (modo de eluição de gradiente) consiste em metanol, acetonitrila e água (pH = 3,0); os eluentes foram monitorados por detector de matriz de fotodiodos (comprimento de onda definido em 265 nm). A relação entre a concentração de VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2, 25(OH) VD-3 no plasma e sua razão de área de pico para o IS foi linear ao longo do intervalo de 5 - 100 ng/mL. Os coeficientes de variação para o ensaio inter-dia e intra-dia foram todos ≤ 9,7% e vieses ≤ 13,1%. As recuperações médias de extração de VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2 e 25(OH) VD-3 do plasma foram todas acima de 80%. O método foi aplicado para a determinação dos níveis de vitamina D no plasma obtido de indivíduos saudáveis. Além disso, foi usado para avaliar a estabilidade de VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2 e 25(OH) VD-3 no plasma sob várias condições encontradas no laboratório clínico.