Pharmaceutica Analytica Acta

Abstrato

Melhorias significativas no desempenho de um procedimento de cromatografia de afinidade estabelecido empregado para purificar um anticorpo monoclonal em 100 ciclos de purificação

Williams Ferro, Rodolfo Valdés, Eutimio Fernández, Yarysel Guevara, Yenisley Medina, Tatiana Álvarez, Andrés Tamayo, Tatiana González, Mayra Wood, Maylín La O, Yodelvis Calvo e Déborah Geada

A cromatografia de afinidade de proteína A-Sepharose é um método muito bem-sucedido para a purificação de imunoglobulinas para uso farmacêutico. No entanto, a eficiência da cromatografia e a vida útil desse método devem ser sempre ajustadas às condições cromatográficas específicas (fonte biológica, tampões, taxas de fluxo, propriedades do anticorpo, temperatura, concentração de proteína, protocolo de limpeza, etc.). Este estudo buscou demonstrar melhorias no desempenho de um procedimento estabelecido de cromatografia de afinidade empregado para purificar o anticorpo monoclonal CB.Hep-1 (mAb) usado na purificação do ingrediente farmacêutico ativo de uma vacina contra hepatite B. Em conclusão, a recuperação relativamente pobre do mAb observada em condições de sistema tampão de 150 mM PBS; pH 8,0/100 mM ácido cítrico; pH 3,0 foi atribuída à ineficácia do tampão de eluição para interromper completamente as interações entre a matriz e o mAb. Nesse sentido, a retenção do mAb CB.Hep-1 na matriz foi auxiliada pelo ligante acoplado à matriz e não por interações inespecíficas. O sistema tampão 1,5 M glicina-NaOH/3 M NaCl; pH 9,0/200 mM glicina-HCl; pH 2,5 melhorou significativamente a recuperação da cromatografia de afinidade sem afetar a pureza do mAb, homogeneidade molecular, vazamento de ligante e conteúdo de DNA de camundongo em 100 ciclos de purificação. Assim, a aplicação de 1,5 M glicina-NaOH/3 M NaCl; pH 9,0/200 mM glicina-HCl; pH 2,5 como sistema tampão permitiu a redução dos custos do mAb CB.Hep-1 e da vacina contra hepatite B, respectivamente.