Tecnologia Genética

Abstrato

sdRNA: siRNA com uma semente de ADN para uma interferência de RNA eficiente e específica do gene alvo

Kumiko Ui-Tei

A interferência por RNA (RNAi), um processo através do qual os pequenos RNA interferentes (siRNAs) induzem o silenciamento de genes pós-transcricional específico da sequência, é comummente reconhecida como uma ferramenta poderosa não só para a genómica funcional, mas também para aplicações terapêuticas. Para alcançar a função precisa do gene alvo e aplicações terapêuticas bem-sucedidas, é necessário selecionar um gene eficiente e específico do gene alvo.

siRNA com efeitos mínimos fora do alvo. Verificámos que a capacidade de induzir efeitos off-target em genes não intencionais está fortemente correlacionada com a estabilidade termodinâmica do duplex formado entre a região semente (posições 2-8 da extremidade 5 da cadeia guia do siRNA) e o mRNA alvo. Consistente com esta propriedade, verificámos que o siRNA quimérico de DNA-RNA (chiRNA) com desoxirribonucleótidos nos oito nucleótidos proximais 5’ da cadeia guia e os nucleótidos complementares na cadeia passageira não exerceram praticamente nenhum efeito fora do alvo devido à baixa estabilidade do duplex DNA-RNA no emparelhamento de bases semente-alvo. No entanto, as atividades RNAi correspondentes para os genes alvo primários também diminuíram para um décimo, em média, pelas substituições de ADN. Aqui, relatamos que os siRNAs com sete desoxirribonucleótidos exclusivamente na região semente (sdRNA) podem exibir uma especificidade eficiente do alvo, mas uma atividade RNAi com um efeito off-target reduzido.