Jornal de Pesquisa e Desenvolvimento em Aquicultura

Abstrato

Papel da regulação de PmRab7 na infecção por WSSV e validação funcional de pequena molécula como inibidor da GTPase PmRab7

Amrendra Kumar, Sudhanshu Shekhar e Saravanakumar A*

A Síndrome da Mancha Branca (WSS) é uma doença viral que ameaça amplamente as indústrias de criação de camarão. É causada pelo baculovírus da síndrome da mancha branca (WSSB). Os camarões (P. monodon e L. vannamei) são incapazes de se defender por materiais "não próprios" e patógenos, devido à resposta imune adaptativa menos definida. Portanto, o presente trabalho foi priorizado para estudar a regulação do transcrito PmRab7, que pode ser um receptor para WSSV (vP28) após implicação de inibidor de molécula pequena. Um total de 70 pequenas moléculas GTPase foram rastreadas inicialmente, contra a estrutura 3D de PmRab7. Entre todas, a molécula CID 1067700 foi selecionada para encaixe molecular (IFD) com PmRab7 na presença de GTP, GDP e Mg++. Além disso, uma pequena molécula foi alimentada na formulação de ração para P. monodon e a regulação transcricional de PmRab7 foi relativamente quantificada contra IFN-α como genes de manutenção durante a infecção por WSSV. Aqui, identificamos um inibidor de PmRab7, CID 1067700, visando o domínio de ligação de DNA de PmRab7 usando estratégia de triagem virtual. O CID 1067700 suprime preferencialmente a atividade da GTPase para alterar GTP e Mg++ de suas posições. Além disso, o CID 1067700 inibe a expressão de genes alvo a jusante de PmRab7, portanto, o CID 1067700 representa novas sondas para o desenvolvimento de inibidores específicos visando o domínio de ligação de DNA de PmRab7 e um potencial terapêutico contra WSSV. Mudanças substanciais foram observadas na regulação de PmRab7 e na multiplicação de WSSV no teste inicial do CID 106700. O CID 106700 leva à inativação bem-sucedida de PmRab7 alterando o GTP e o Mg++ de suas posições nativas. A regulação de PmRab7 foi aumentada de 5 a 8 vezes durante 72 horas de infecção. A substituição de GTP por pequenas moléculas revelou uma regulação negativa significativa do gene PmRab7 durante a infecção por WSSV. Notavelmente, a carga viral (absolutamente quantificada) também foi reduzida quando o PmRab7 foi regulado negativamente. A internalização do WSSV foi diretamente ligada à regulação do PmRab7.