Jornal de pesquisa e terapia com células-tronco

Abstrato

Geração de células estaminais mesenquimais induzidas robustas, eficientes e puras a partir de células estaminais pluripotentes induzidas por mRNA em suspensão

Rajneesh Verma, Pornpun Saengmuang, Tanabodee Payuha, Julie D Mendoza, Rotsarin Narang, Naphapatsorn Bondee, Sergei Dmitrievs, Paul Michael Collier

As células estaminais mesenquimais (MSCs) estão envolvidas em muitos ensaios clínicos promissores que abordam doenças muito complicadas. Muitos factores estão a determinar a segurança nestes ensaios clínicos, tais como a pureza da população de células MSC derivadas de tecidos utilizadas em terapias. Além disso, a eficácia das CTM injetadas deve ser testada in vitro , antes da aplicação, através da capacidade de proliferação e reprodutibilidade em passagens contínuas. Além disso, a importância de escolher a fonte certa de derivação de CTM para o sucesso da terapia celular e do transplante. Este estudo demonstra a geração robusta de iMSCs a partir de células estaminais pluripotentes induzidas (iPSC) de dador humano saudável (com teste genético completo feito anteriormente) utilizando um método não integrativo (mRNA). Este método de conversão compreende (i) diferenciar uma população de iPSCs em suspensão sem iMatrix, (ii) passar as células diferenciadas na etapa (i) na presença de um meio MSC condicionado durante algum tempo e sob condições suficientes para produzir iMSC em cultura para longo prazo sem qualquer sinal de memória epigenética.

A análise da expressão dos marcadores pluripotentes (Oct-4, SSEA-4, Sox-2, Tra-1-60) foi confirmada por citometria de fluxo e imunocitoquímica através de avaliação visual ao microscópio de fluorescência. Não foi desenvolvido nenhum teratoma por injeção in vivo da população de iMSC em hamsters machos, confirmando a pureza transformada das iMSCs e a propriedade imunomoduladora em cultura sem iPSC, respetivamente. Para os estudos de ciclo celular e senescência, as iMSCs in vitro puras foram testadas através de citometria de fluxo através de análise de expressão de CD73, 90 e 105 e comparadas com UC-MSC. Posteriormente, as iMSCs demonstraram a tridiferenciação de condrócitos, osteócitos e adipócitos em relação às UC-MSCs, o que poderá permitir abordar as desvantagens da utilização de CTM adultas e, assim, fornecer uma ferramenta valiosa para utilização futura em vários ambientes clínicos.