Bioquímica e Bioquímica Analítica

Abstrato

Remodelação de balsas lipídicas durante a capacitação in vitro e reação acrossómica de espermatozóides carneiros

Carmen Colas, Rosaura Perez-Pe, Adriana Casao, Mario Ollero, Lucia Calleja, Margarita Gallego, Teresa Muiño-Blanco e José A Cebrian-Perez

Enquadramento: As balsas lipídicas são frequentemente conhecidas como Microdomínios Resistentes a Detergentes (DRMs). Relatamos pela primeira vez a presença de dois marcadores de balsas lipídicas, a caveolina-1 e o gangliosídeo GM1, na superfície do espermatozóide ovino, e o efeito da capacitação in vitro e da reação acrossómica na distribuição destes marcadores, no conteúdo proteico e na composição lipídica do DRM e frações não DRM.

Métodos: A caveolina-1 e o gangliosídeo GM1 foram evidenciados por análise imunocitoquímica e de fluorescência, respetivamente. As frações DRM e não DRM foram separadas por um gradiente de densidade OptiPrepTM. Foram determinados o colesterol por fluorometria, o GM1 por reação de peroxidase, o teor proteico por espectrofotometria e o perfil de ácidos gordos por cromatografia gasosa.

Resultados: A caveolina-1 foi evidenciada no acrossoma de 59,2 ± 4,3% de espermatozóides frescos, e a proporção de células coradas aumentou (P<0,05) após a capacitação. O GM1 foi detectado no pós-acrossoma e na cauda de todos os espermatozóides, não tendo sido encontrada qualquer alteração após a capacitação. O colesterol e o GM1 distribuíram-se ao longo de todo o gradiente, com um pico nas frações DRM. Uma maior proporção (P<0,001) de ácidos gordos saturados foi encontrada nas frações de DRM, confirmada pelo índice de insaturação e maior relação lípido/proteína. A capacitação in vitro induziu uma diminuição do conteúdo em ácidos gordos saturados tanto nas frações DRM (P<0,001) como nas frações não-DRM (P<0,01). Os ácidos gordos polinsaturados aumentaram nos DRMs após a reação acrossómica. Todos os tratamentos resultaram num menor teor de colesterol e proteínas nos DRM (P<0,01) e nas frações não-DRM (P<0,001), e num maior teor de GM1 nos DRM (P < 0,05). Conclusões: Microdomínios semelhantes a rafts lipídicos foram isolados numa região discreta do gradiente. O seu elevado teor em ácidos gordos saturados confere um ambiente altamente ordenado. A sua composição é modificada durante a capacitação in vitro e reação acrossómica.
Significado geral: Estes resultados representam a primeira caracterização do DRM dos espermatozóides ovinos e podem contribuir para uma melhor compreensão do mecanismo de aquisição do potencial de fertilização dos espermatozóides.