Jornal de Bioequivalência e Biodisponibilidade

Abstrato

Diálise de equilíbrio rápido (RED): uma técnica de triagem de alto rendimento in vitro para ligação de proteínas plasmáticas usando plasma humano e de rato

Jitendra Kumar Singh, Anant Solanki, Reema C Maniyar, Debarupa Banerjee e Vikas S Shirsath

Determinar a extensão em que uma molécula se liga às proteínas plasmáticas é uma fase crítica do desenvolvimento de medicamentos porque a quantidade de medicamento ligado ao plasma influencia a dosagem do composto, eficácia, taxa de depuração e potencial para interações medicamentosas. A determinação das frações livre (%Fu) e ligada (%Ligado) de um artigo de teste no plasma é, portanto, um parâmetro crítico, que é rotineiramente determinado no processo de descoberta e desenvolvimento de medicamentos. Essa determinação é possibilitada pela diálise de equilíbrio, um método aceito e padrão para estimativa confiável da fração de medicamento não ligado no plasma. Embora seja o método preferido, a diálise de equilíbrio historicamente tem sido trabalhosa, demorada, proibitiva em termos de custo e difícil de automatizar. Um ensaio de ligação de medicamento-proteína de Diálise Rápida de Equilíbrio (RED) usando LC-MS/MS foi desenvolvido usando uma nova técnica que resultou em precisão de ensaio significativamente melhorada e oferece uma vantagem de velocidade. Um painel de compostos cobrindo uma gama de ligações proteicas esperadas foi testado em plasma de espécies humanas e de ratos. Um método sensível e seletivo usando espectrofotômetro de massas tandem quádruplo interligado com ionização por eletro spray foi desenvolvido para a quantificação de fármacos não ligados em plasma pré-tratado. As fases móveis usadas foram 0,1% de ácido fórmico em acetonitrila: 0,1% de ácido fórmico em água com método de HPLC de gradiente. A fração não ligada de fármacos foi detectada por espectrômetro de massas operado no modo ESI. Além disso, os dados para um conjunto de dez compostos foram comparados com valores da literatura. Com o método descrito, é possível rastrear um número relativamente grande de compostos para PPB em um ambiente de descoberta de fármacos.