Bioquímica e Bioquímica Analítica

Abstrato

Detecção rápida de proteínas em electroforese unidimensional em gel de poliacrilamida utilizando um branqueador óptico fluorescente barato

Sashidhar RB, Tanuja Kosuri e Sujata Nayak

Um branqueador óptico fluorescente de tecidos comercial Ranipal ^® (F-OB) foi empregado com sucesso para corar proteínas em SDS -1D-PAGE nativo e SDS . O F-OB foi purificado utilizando um sistema solvente bifásico de diclorometano e água. O valor Rf ₍ 0,63) do F-OB purificado e bruto foi comparável em TLC. A espectrometria de massas do F-OB purificado indicou um pico base a 414 (m/z). Os máximos de absorção e emissão de F-OB foram de 350 nm e 430 nm, respetivamente. O F-OB poderia corar as proteínas tanto pré como pós-corrida electroforética, em gel nativo. A coloração pós-eletroforética foi rápida e necessitou de 20 minutos para visualizar as proteínas coradas. Por outro lado, em géis de SDS, foram necessários 20 minutos adicionais para a extração de SDS antes de corar as proteínas com F-OB. Verificou-se que o SDS interfere com a ligação do F-OB às proteínas. Foram carregadas várias concentrações de marcadores de peso molecular e a sua intensidade fluorescente foi representada graficamente em relação à concentração das proteínas. Os valores de r ² variaram de 0,965 a 0,997 indicando uma excelente linearidade. A deteção da anidrase carbónica ficou na gama de 8,0-800 ng. Ao contrário da maioria dos corantes utilizados para a coloração de proteínas, a coloração com F-OB pôde ser realizada em tampão tanque (2 mg/100 mL) e foi também reversível. O F-OB, talvez fosse o corante fluorescente com melhor relação custo-benefício para corar as proteínas (US$ 0,04/25,0 g). O F-OB revelou ser um corante fluorescente simples, seguro, sensível, menos demorado e económico como alternativa para a coloração de proteínas em géis de poliacrilamida.