Jornal de Patologia Vegetal e Microbiologia

Abstrato

Detecção e quantificação rápida de Fusarium udum em amostras de solo e plantas usando PCR em tempo real

Sukumar Mesapogu, Bandamaravuri Kishore Babu, Achala Bakshi, Somasani S. Reddy, Sangeeta Saxena, Alok K. Srivastava e Dilip K. Arora

O ensaio de detecção baseado em PCR em tempo real foi desenvolvido para Fusarium udum, causador da murcha vascular do feijão-guandu. O gene Histona-3 de F. udum foi direcionado para projetar primers e sondas específicas para cada espécie. Um estudo comparativo foi realizado para desenvolver um procedimento confiável e reprodutível para detecção e quantificação de F. udum a partir de diversas amostras. A sensibilidade e especificidade dos oligonucleotídeos foram avaliadas por meio de hibridização dot blot, ensaios de PCR padrão e em tempo real. A sonda HFUSP mostrou alto grau de sensibilidade para DNA obtido de culturas puras de F. udum ao de amostras de DNA ambientais. O ensaio qPCR diferenciou especificamente o F. udum de espécies intimamente relacionadas de Fusarium, outros micróbios de teste e amostras ambientais. A curva de fusão única em 84,17 e uma banda monomórfica de 200 pb indicam a especificidade e autenticidade dos ensaios de PCR. Assim, o ensaio de PCR em tempo real pode ser usado como um procedimento rápido e eficaz que pode detectar quantidades mínimas de F. udum em ambientes complexos. Portanto, o ensaio de PCR em tempo real demonstrado no presente estudo pode ser usado com sucesso para detecção e monitoramento de F. udum para infecção precoce e epidemiologia da doença murcha vascular do feijão-guandu.