Jornal de pesquisa e terapia com células-tronco

Abstrato

Purificando neurónios imaturos a partir da diferenciação da descendência de células estaminais neurais usando um método simples de agitação

Hassan Azari, Sharareh Sharififar, Roya P Darioosh, Maryam Rahman, Jeff M Fortin e Brent A Reynolds

Objectivo: As populações de células neuronais enriquecidas são ferramentas valiosas tanto para investigações laboratoriais como para aplicações de terapia celular. No entanto, as abordagens de purificação celular disponíveis requerem equipamentos dispendiosos, como o FACS ou o MACS, que limitam a sua acessibilidade universal. Neste estudo, desenvolvemos um método eficiente para purificar células neuronais imaturas a partir da diferenciação da descendência de células estaminais neurais (dNSC) com base nas suas propriedades diferenciais de fixação de substrato sem utilizar ferramentas dispendiosas de separação de células. Métodos: As células estaminais neurais foram colhidas da eminência ganglionar de cérebros de ratinhos embrionários do dia 14, utilizando o ensaio da neuroesfera. As neuroesferas foram então dissociadas em células únicas e diferenciadas empregando o método de ensaio de neuroblastos. Após uma breve tripsinização, a cultura dNSC foi suavemente agitada a 150 rpm durante 30 min para separar os principais aglomerados de células neuronais da monocamada de células astrocíticas subjacentes. O rendimento de purificação neuronal, a contaminação de astrócitos e a presença de células em divisão foram comparados com um método de purificação MACS utilizando o anticorpo PSANCAM. Resultados: Embora um rendimento neuronal de 97,1 ± 0,45% tenha sido alcançado utilizando o MACS; atingiu 97,9 ± 0,6% utilizando o método de agitação que não foi significativamente diferente. 0,15% utilizando o método de agitação. Além disso, 4,41 ± 0,23% e 5,3 ± 0,4% das células isoladas nos métodos MACS e agitação, respetivamente, eram células em divisão imunorreativas Ki-67, das quais 97,34 ± 1,6% e 97,9 ± 0,7% co-expressavam β III- tubulina, confirmando a sua identidade neuronal. Além disso, com base no ensaio de células formadoras de colónias neurais, o método de agitação resultou na geração de uma população de células neuronais homogénea sem qualquer contaminação genuína de NSC. Conclusões: O método de purificação por agitação permite a separação fácil, de baixo custo, eficiente e em larga escala de neurónios imaturos da descendência dNSC, beneficiando potencialmente aplicações básicas e clínicas.