Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Purificação, sequenciação de aminoácidos e termoestabilidade de uma esterase extracelular de baixo peso molecular produzida por Bacillus Subtilis NRRL 41270 em fermentação

Papagianni M, Papamichael EM

Verificou-se que a actividade de esterase extracelular em caldos de fermentação de Bacillus subtilis NRRL 41270 reside numa pequena proteína com um peso molecular inferior a 10 kDa. Após purificação, a atividade esterase no dibutirato de fluoresceína foi estimada em 12 U/min/mg de proteínas. A saturação da enzima foi observada a uma concentração de substrato de 5 μM. A esterase produzida tributirina hidrolisada. A sua atividade específica foi estimada em 17,8 μmol de ácido libertado/min/mg de proteínas. A pequena proteína foi submetida a cromatografia de exclusão por tamanho, SDS-PAGE e sequenciação de aminoácidos. A análise revelou uma sequência dos seguintes resíduos de aminoácidos: eevaetysfyhitphdystshispapvqffspap, segundo a qual a molécula possui 34 resíduos de aminoácidos e uma massa molecular calculada de 3853, o que estava de acordo com os resultados de filtração em gel e SDS-PAGE. A análise baseada em sequências e a utilização de ferramentas de bioinformática não mostraram qualquer semelhança significativa com proteínas conhecidas, ao mesmo tempo que revelaram uma molécula fortemente hidrofóbica, com uma conformação α-helicoidal no N-terminal, sendo o resto da molécula rico em folhas β. A enzima pareceu ser termoestável com mais de 85% da atividade original mantida após 120 horas de incubação a 60°C. O organismo produtor e as características da microenzima sugerem o caso de um biocatalisador biotecnologicamente interessante que deve ser mais investigado em termos da sua estabilidade e características de produção.