Pharmaceutica Analytica Acta

Abstrato

Perfil da atividade da monoacilglicerol lipase cerebral de ratos usando um ensaio de espectrometria de massa de ionização por eletrospray positivo por cromatografia líquida de monitoramento de íons selecionados aprimorado por aduto de amônia

Gary W Caldwell e Wensheng Lang

2-Arachidonoylglycerols (2-AG) é um dos principais endocanabinoides no sistema nervoso central. A regulação positiva da sinalização de endocanabinoides centrais pela inibição seletiva da atividade da monoacilglicerol lipase (MAGL) cerebral é uma abordagem terapêutica potencial na modulação da dor, obesidade e diabetes, para citar alguns. Assim, um método analítico sensível e confiável para determinação dos níveis de endocanabinoides no cérebro é essencial para a descoberta de inibidores de MAGL. A medição precisa dos níveis de monoacilgliceróis (MAG), usando espectrometria de massa de ionização por eletrospray positiva por cromatografia líquida (LC / +ESI / MS) e MS em tandem, é um desafio, pois os endocanabinoides cerebrais não são apenas suscetíveis ao estresse na fase de vida do estudo, mas também propensos ao metabolismo post-mortem, migração de acila (ou seja, conversão de 2-MAG para 1(3)-MAG), formação de íons adutores de metal e hidrólise química gerando os mesmos produtos que aqueles pela enzima alvo. Para evitar esses artefatos, desenvolvemos um método simples de LC/+ESI/MS para detecção direta de cátions adutores de amônio dos principais MAGs no modo de monitoramento de íons selecionado (SIM). Para o ensaio de inibição de MAGL in vitro, uma eluição isocrática de LC foi usada para separação de linha de base de MAGs e seus isômeros de migração de acila produzidos durante a incubação a 37oC com homogeneizado de cérebro de rato. Para minimizar o metabolismo post-mortem e a isomerização de MAGs para estudos in vivo, o cérebro de rato foi homogeneizado diretamente em quatro mililitros de etanol para cada grama de tecido cerebral e uma eluição de gradiente linear de LC foi aplicada para amplo perfil endocanabinoide. O método SIM LC/+ESI/MS demonstrou ser útil para avaliação cerebral in vitro da potência inibitória de inibidores de MAGL e amida hidrolase de ácido graxo (FAAH) e para avaliação cerebral in vivo para estudos de engajamento de alvo.