Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Produção, Purificação e Caracterização de L-Asparaginase de Aspergillus endofítico marinho sp. ALAA-2000 sob Fermentação Submersa e em Estado Sólido

Mervat Morsy Abbas Ahmed, Nageh Abo Dahab F, Taher Taha M e Fareed Hassan SM

Entre todos os fungos endofíticos recuperados da esponja mole marinha Aplysina fistularis, 72,2% foram capazes de produzir L-asparaginase. De entre todos os isolados obtidos, o Aspergillus sp. ALAA-2000, o produtor hiperativo do agente anticancerígeno, L-asparaginase, sob fermentação submersa (SMF) e fermentação em estado sólido (SSF) de diferentes resíduos agrícolas foi selecionado para a otimização do processo de extração; otimização dos parâmetros físico-químicos, que afetam a produção de L-asparaginases em SSF e otimização dos parâmetros das L-asparaginases purificadas. A atividade máxima da L-asparaginase 23,34 U/ml foi recuperada da soja com água quente a 40 °C e 150 rpm durante 30 min sob SSF e 30,64 U/ml sob fermentação submersa utilizando glicose como fonte de carbono e asparagina como fonte de azoto. Dois tipos de L-asparaginase (AYA-1 e AYA-2) foram purificados a partir do sobrenadante da cultura de Aspergillus sp. ALAA-2000 através de precipitação com sulfato de amónio e cromatografia de filtração em gel (sephadex G-200). Os pesos moleculares das enzimas foram de 25 kDa (AYA-1) e 31 kDa (AYA-2). Os parâmetros da L-asparaginase purificada foram optimizados para AYA-1 (pH 6,0, estável de 30°C a 50°C durante 60 min, tempo de reacção 15 min e concentração de substrato 1,275 mg/ml) e enzima AYA- 2 (pH 10, estável a 30°C a 70°C durante 60 min, tempo de reação 15 min e concentração de substrato 1,275 mg/ml). Já os inibidores de metaloproteases, agentes quelantes EDTA, não tiveram qualquer efeito sobre a L-asparaginase. Estes resultados sugerem que a L-asparaginase não era metaloproteases.