Jornal de pesquisa e terapia com células-tronco

Abstrato

Produção de células estaminais mesenquimais derivadas de tecido adiposo equino de grau de boas práticas de fabrico para uso terapêutico

Shashank Gowda, Aarya Hari, Basavaraj Chougule, Manoj Kumar Reddy, Abhishek Chandanan, Minita Sodhi, Nicole Koshy, Lyle Fonseca e Satish Totey

As células estaminais mesenquimais (MSC) estão atualmente a ser avaliadas em estudos clínicos em equinos quanto ao seu potencial para tratar vários distúrbios e lesões. Estudos demonstraram que as células estaminais autólogas e alogénicas parecem ser seguras. No entanto, é garantido que um método eficiente de expansão celular que seja fiável e económico forneça células estaminais de grau clínico prontas a utilizar. O nosso estudo teve como objetivo determinar as condições ideais de cultura para a expansão eficiente de células estaminais em larga escala. Produzimos células estaminais mesenquimais derivadas do tecido adiposo equino padrão cGMP em larga escala. Cinco combinações diferentes de meio - meio knockout de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM-KO), meio essencial mínimo modificado alfa (α-MEM), 50:50 DMEM-KO/α-MEM, 75:25 DMEM-KO/α- MEM e 25:75 DMEM-KO/α-MEM - a densidades de sementeira de 1.000, 2.000, 3.000, 4.000 e 5.000 células/cm2, foram utilizados para determinar as condições ideais de cultura para a produção em grande escala. Foram analisadas a cinética de crescimento, imunofenótipos, cariótipos, morfologia, diferenciação de trilinhagem, proliferação de células T, positividade do vírus, toxicidade pré-clínica e expressão de marcadores de pluripotência. Entre as combinações de meios e densidades de sementeira testadas, o 25:75 DMEM-KO/α-MEM a uma densidade de sementeira de 5000 células/cm2 foi considerado ideal para a expansão em larga escala. Esta combinação de meios proporcionou um rendimento celular significativamente mais elevado do que as outras combinações de meios, preservando ao mesmo tempo as suas características de células estaminais e potencial de diferenciação. Os resultados indicaram que a adoção de um sistema de cultura apropriado melhorou significativamente o rendimento celular, permitindo assim a produção de células suficientes para aplicação terapêutica de forma económica. Os resultados mostraram também que o método de expansão em grande escala requer uma manipulação mínima das células e pode ser expandido ex vivo em duas passagens, mantendo as características das verdadeiras células estaminais.