Bioquímica e Bioquímica Analítica

Abstrato

Preparação de um anticorpo monoclonal contra a saicosaponina C e o estabelecimento do seu ensaio de imunoabsorção enzimática

Baoping Qu, Jiayang Sai, Huihua Qu, Shuchen Liu, Jinjun Cheng, Wenchao Shan, Yan Zhao e Qingguo Wang

Um anticorpo monoclonal (MAb) 1E11D8 contra a saikosaponina c (SSc) foi preparado por uma fusão celular com esplenócitos e linhagem celular SP2/0 de mieloma de ratinho sensível à hipoxantina-aminopterina-timidina. O MAb-1E11D8 anti-ES preparado tem uma nova característica que apresenta uma elevada especificidade para a saicosaponina c, saicosaponina d e saicosaponina a, três principais oleananos-saponinas em Radix Bupleuri. Utilizando o MAb-1E11D8 anti-ES, foi desenvolvido um ELISA fiável para a deteção de ES. O sistema apresenta um intervalo de medição completo de 156,25 ng·mL-1 a 2500 ng·mL-1 no caso do ES em ELISA competitivo indireto (icELISA). A equação de regressão foi y=-0,283 ln(C) +2,3301 com um coeficiente de correlação de 0,99. A precisão e a exatidão do método icELISA foram avaliadas pelas variações entre as réplicas de poço para poço (intra-ensaio) e de placa para placa (inter-ensaio). Os valores obtidos para estes parâmetros estavam dentro da normalidade (<10%). As taxas de recuperação variaram entre 99,82 a 103,59%. O método ELISA foi posteriormente validado para ser útil no levantamento de ES em prescrições tradicionais chinesas.