Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Sobreexpressão de um gene de quitinase do fungo termófilo Thermomyces lanuginosus em Saccharomyces cerevisiae e caracterização da quitinase recombinante

M. Prasad e P. Palanivelu

Um gene de quitinase do fungo termófilo Thermomyces lanuginosus ATCC 44008 foi clonado e sobre-expresso em Saccharomyces cerevisiae SEY 2101. A quitinase recombinante foi produzida como proteína solúvel secretada. A atividade enzimática foi máxima ao quarto dia a 30ºC no meio de indução. A quitinase sobre-expressa apresentou uma atividade ótima a pH 6,5 e a 60ºC. A quitinase recombinante atribuiu uma notável termoestabilidade ao reter mais de 60% da atividade enzimática após 6 horas a 50°C. A massa molecular da quitinase sobre-expressa foi de 42 kDa medida por SDS-PAGE. Os parâmetros cinéticos como o KM e o Vmax da enzima foram de 0,403 mM e 8,74 mmoles/min/mg de proteína, respetivamente. A síntese da quitinase recombinante foi fortemente reprimida pela glicose. O inibidor da tradução eucariótico, a cicloheximida, no meio de indução, apresentou 10% de atividade mais elevada, enquanto 30% da atividade foi inibida pelos inibidores da transcrição, viz. 8-azaguanina e 8-hidroxiquinolina. A quitinase recombinante sobre-expressa pode encontrar potencial aplicação na indústria farmacêutica para preparar quitooligossacarídeos.