Biologia Unicelular

Abstrato

Consequências multifuncionais de uma única mutação do CFTR da importância de analisar mutações por testes funcionais

Ladeveze V, Farhat R, El Seedy A e Kitzis A

A fibrose cística é a doença rara mais frequente na população caucasiana. Esta doença hereditária recessiva grave é causada por mutações no gene regulador de condutância transmembrana da fibrose cística (CFTR). Este gene codifica uma proteína expressa na membrana apical das células epiteliais. As mutações são classificadas em seis classes com base em seus efeitos e gravidade do fenótipo. A mutação F508del é a mutação mais frequente do gene CFTR; ela induz um dobramento incorreto da proteína, bloqueando assim sua maturação, localização da membrana e, no final, sua funcionalidade.

Este estudo combina uma abordagem clínica e análises celulares de múltiplos níveis para determinar as consequências fisiopatológicas da mutação do exon 10 do CFTR c.1392G>T (p.Lys464Asn), detectada em um paciente com FC com uma deleção de deslocamento de quadro em trans e um TG(11)T(5) em cis. Primeiro, o splicing foi estudado por experimentos de minigene, com diferentes alelos TG(m)T(n), e por extratos de mRNA de células nasais para determinar a consequência de c.1392G>T. Então, o processamento da proteína p.Lys464Asn foi avaliado, em celulo, por análises de western blotting.

A mutação c.1392G>T afeta o splicing do exon 10 induzindo sua deleção completa e codificando um transcrito de mudança de quadro. O polimorfismo TG (11)T(5) aumenta os efeitos dessa mutação no splicing aberrante, sugerindo a importância do alelo complexo. A análise do mRNA obtido de células epiteliais das vias aéreas maternas confirmou esses resultados em celulo. No nível de proteína, a proteína p.Lys464Asn não apresentou forma totalmente glicosilada.

Assim, a mutação c.1392G>T sozinha ou em associação com o trato poli T revelou impactos óbvios no splicing e no processamento da proteína CFTR. O alelo complexo c.[T(5); 1392G>T] contribui para o fenótipo da FC ao afetar o splicing e induzir um defeito grave de processamento incorreto. Esses resultados demonstram que a classificação clássica de mutações CFTR não é suficiente: estudos in vivo e in cellulo de um possível alelo complexo em um paciente são necessários para fornecer classificação correta da mutação CFTR, aconselhamento médico adequado e estratégias terapêuticas adaptadas.