Tecnologia Genética

Abstrato

Detecção molecular e expressão de azurina: uma proteína anticancerígena a partir de isolados locais de espécies de Pseudomonas

Aslam F, Farooq A, Qaiser H, Bajwa S, Saleem F e Naz S

A azurina foi reconhecida como fármaco anticancerígeno em 2000 e desempenha um papel importante na indução de apoptose e citotoxicidade. A azurina pode incorporar-se no citosol e no material nuclear após penetrar nas células tumorais e estabilizar a p53 (uma proteína supressora tumoral) que facilita o aumento do seu nível no interior da célula. Um fragmento de Azurina amplificado por PCR de 447 pb de Pseudomonas aeruginosa foi clonado no vector de clonagem pTG19-T. A sequência de ADN prevê uma pré-proteína com um péptido sinal de 19 aminoácidos seguido por uma proteína azurina madura de 128 aminoácidos. O gene da azurina foi clonado no vetor pET22b. O vetor rpET22b (+)-Azu recombinante foi clonado em células BL21-Codon Plus (DE3). A elevada expressão otimizada do gene da azurina foi obtida a uma concentração de 0,5 mM de IPTG após 6 horas a 37ºC. A sequenciação mostra 99,8% de homologia de sequência com a sequência reportada de azurina. Uma mutação silenciosa, ou seja, CCA para CCG, é detetada no 17º aminoácido. No entanto, o aminoácido resultante (prolina) permanece o mesmo.