Bioquímica clínica e médica

Abstrato

Análise molecular da metilação do gene RASSF1 e expressão de mRNA no cancro da mama esporádico

Maria Lagiou, Nikoleta Poumpouridou, Nikolaos Goutas, Dimitrios Vlachodimitropoulos, Aggeliki Pappa, Evi Lianidou, Triantafyllos Liloglou e Christos Kroupis

Introdução: O objetivo deste estudo foi validar métodos inovadores e fiáveis ​​para estudar a metilação do ADN do primeiro promotor do gene RASSF1 (de onde é transcrito o seu transcrito primário RASSF1A no tecido mamário), a sua expressão de mRNA e a sua avaliação no cancro do mama esporádico. Materiais e métodos: Foram analisados ​​o ADN e o ARN de 81 tecidos congelados de cancro da mama com dados histopatológicos conhecidos, bem como de 4 tecidos mamários normais. Os níveis de metilação do ADN foram avaliados por Pirosequenciamento, analisando 9 dinucleotídeos CpG na ilha CpG do primeiro promotor RASSF1. Para a expressão de mRNA foi utilizado um método de RT-qPCR em tempo real e validado com padrões sintéticos, com o kit SYBR Green PCR e um conjunto adequado de primers padronizados (Qiagen) para todas as variantes do transcrito RASSF1 (exceto G). Para a quantificação relativa da expressão de RASSF1, foi utilizado o método 2-ΔCt com beta2-microglobulina como gene de referência. Resultados: 59 amostras foram caracterizadas como RASSF1 normalmente metilado (72,8%), enquanto 22 amostras como hipermetiladas (27,2%). Além disso, 40 amostras foram classificadas como sobre-expressando mRNA de RASSF1 (49,4%), enquanto 41 (50,6%) como sub-expressando. Não foi encontrada qualquer correlação inversa entre a metilação e a expressão de RASSF1 (p=0,207). A regressão logística mostrou que a probabilidade de infiltração ganglionar foi aumentada pela presença de recetores ER negativos (p=0,008, OR 0,09, IC 0,14-0,52), pela percentagem de metilação (p=0,006, OR 7, 96, IC 1,82-34,86) e o nível de expressão de RASSF1 (p=0,047, OR 3,94, IC 1,02-15,29). A análise de sobrevivência mostrou que existe uma correlação marginal estatisticamente significativa entre a metástase e a sobreexpressão do mRNA RASSF1 (teste de log rank, p = 0,040). Conclusões: Os ensaios avaliados parecem fornecer informações potencialmente úteis para a gestão clínica dos carcinomas da mama. Um ensaio fiável semelhante para a metilação do segundo promotor RASSF1 deverá ser avaliado no futuro. Relativamente ao estudo de expressão, uma nova estratégia de desenho com sondas específicas para todos os diferentes transcritos de RASSF1 proporcionaria um poder adicional no estudo e potenciaria a utilização de novos biomarcadores RASSF1 na avaliação clínica do cancro da mama esporádico.