Jornal de Engenharia Química Avançada

Abstrato

Reator microfluídico para operação sequencial de reação em cadeia da polimerase/reação de deteção de ligase

Masahiko Hashimoto, Kazuhiko Tsukagoshi e Steven A. Soper

Desenvolvemos um biorreator microfluídico para a deteção de mutações de base única no ADN genómico, onde uma reação em cadeia da polimerase primária (PCR) e uma reação de deteção de ligação alelo-específica (LDR) foram conduzidas em sequência. O efeito do carryover da PCR primária no LDR subsequente foi minuciosamente investigado em termos de rendimento e fidelidade do LDR, e verificámos que um tratamento pós-PCR para os amplicons antes da sua incorporação na fase LDR não era necessariamente necessário, o que permitiu Recomendar a utilização um misturador difusivo simples para misturar online a solução pós-PCR com os reagentes LDR. Também realizámos uma análise numérica para estimar aproximadamente o comprimento do canal necessário para a mistura difusiva. Demonstramos com sucesso a capacidade do sistema para detetar um ADN mutante em 1000 sequências normais a uma velocidade de processamento relativamente elevada (tempo total de processamento = cerca de 28,1 min).