Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Método colorimétrico de D-aminoácido oxidase de rendimento médio/alto para a determinação de D-aminoácidos. Pedido de Racemases de Aminoácidos

Armand Berneman, Marcelo Alves-Ferreira, Nicolas Coatnoan, Nathalie Chamond e Paola Minoprio

A deteção e quantificação de aminoácidos livres em amostras ainda exige tecnologias elaboradas, poderosas e geralmente de elevado custo e, por vezes, demoradas, como a cromatografia gasosa, HPLC ou técnicas de troca de coluna altamente seletivas e sensíveis. Aqui, comprometemo-nos a desenvolver um método de placa de microtitulação simples e de uma etapa para detetar e/ou quantificar a maioria dos D-aminoácidos em soluções baseadas na enzima D-aminoácido oxidase e na geração de quantidades estequiométricas de peróxido de hidrogénio. A inclusão de peroxidase de rábano e OPD permite a determinação da concentração de D-aminoácidos através da absorvância dos produtos de reacção em comparação com diluições em série de quantidades equimolares de padrões de aminoácidos L/D. A metodologia é facilmente adaptada para uma análise de médio/alto rendimento das atividades dos aminoácidos racemase.