Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Isolamento, Purificação Parcial e Caracterização da L-Asparaginase de Hedgehog Serum

Ekpa Emmanuel, Nzelibe HC e Onyike E

A necessidade de explorar ainda mais outras fontes de terapia para as leucemias motivou este trabalho atual. Já se sabe que a L-asparaginase possui muitos potenciais no tratamento do cancro dos glóbulos brancos, mas as fontes desta enzima e as suas propriedades determinam a eficácia deste medicamento. Geralmente, para que a asparaginase fosse idealmente adequada para utilização em terapia antitumoral, tinha de satisfazer uma variedade de critérios. O organismo seleccionado deverá produzir a asparaginase em elevada quantidade ou rendimento e deverá ser capaz de ser isolado a partir de fontes simples de mamíferos. Os procedimentos desenvolvidos para a purificação da enzima devem ser o mais rápidos e simplificados possível. A enzima purificada deverá ter estabilidade a longo prazo no armazenamento, actividade máxima a um pH fisiológico e um Km para substrato abaixo da concentração do substrato no sangue. Portanto o objetivo da presente pesquisa foi purificar e caracterizar parcialmente esta enzima do soro Hedgehog, a fim de comparar os seus potenciais antileucémicos com aqueles da literatura documentada para possível aplicação médica futura. A L-asparaginase foi isolada e parcialmente purificada a partir de soro Hedgehog, que também é conhecido por ser um reservatório de muitas outras proteínas úteis, incluindo antivenenos, utilizando um perfil de quatro etapas de fracionamento com sulfato de amónio, diálise e cromatografia de troca iónica e filtração em gel. A enzima proporcionou um rendimento global de 77,58%, pH e temperatura ótimos de 7,8 e 39ºC respetivamente, e Km de 0,0125 mM. A filtração em gel deu um peso molecular aproximado de 139.000 Da, enquanto que o SDS PAGE indicou um peso molecular da subunidade de 36.000 e 34.600 Da, respectivamente. A enzima também catalisa a hidrólise da glutamina, embora ligeiramente. O Mg2+ e o Zn2+ servem como ativadores da L-asparaginase sérica Hedgehog, enquanto a inibição de iões pesados ​​como o Hg2+ também foi observada. Este trabalho mostra que fontes desta enzima em mamíferos podem ser mais preferíveis para o tratamento de tumores dependentes de asparagina no futuro.