Jornal de pesquisa e terapia com células-tronco

Abstrato

Método melhorado para o isolamento de cardiomiócitos neonatais de ratos com maior rendimento de células progenitoras cardíacas C-Kit+

Jennifer Rutering, Matthias Ilmer, Alejandro Recio, Michael Coleman, Jody Vykoukal e Eckhard Alt

A terapia celular representa um novo paradigma promissor para o tratamento das doenças cardíacas, uma das principais causas de morte no mundo industrializado. A recente descoberta de células progenitoras cardíacas (CPCs) c-Kit+ residentes em tecidos alimentou esforços científicos para explorar terapeuticamente estas células para intervenções regenerativas, e a cultura primária de cardiomiócitos é um modelo in vitro comum para investigar mecanismos moleculares básicos subjacentes à degeneração e regeneração cardíaca . Os protocolos atuais para o isolamento de cardiomiócitos resultam frequentemente em baixo rendimento celular e esgotamento insuficiente de fibroblastos, que depois superam os cardiomiócitos em cultura. Neste protocolo descrevemos um método melhorado para o isolamento de cardiomiócitos de ratos neonatais que permite também rendimentos aumentados de CPCs. Técnicas suaves de processamento enzimático e mecânico de tecidos garantem um elevado número de células e viabilidade, enquanto a subsequente centrifugação em gradiente de densidade Percoll minimiza os fibroblastos. Comparámos as vantagens de diferentes enzimas e verificámos que a Colagenase 2, por si só, leva a rendimentos muito elevados de cardiomiócitos, enquanto a aplicação da mistura de enzimas Matrase™ aumenta o rendimento relativo dos CPCs c-Kit+ até 35%. Os cardiomiócitos e os CPCs isolados com este protocolo podem constituir uma importante fonte celular para a investigação de doenças cardíacas, bem como de abordagens terapêuticas baseadas em células.