Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Ensaios melhorados para identificar os efeitos antibióticos em bactérias planctónicas e sésseis utilizando o exemplo do 1,8-Cineol

Brotzmann V, Schuermann M, Kaltschmidt B, Kaltschmidt C e Sudhoff H

O rastreio de substâncias antibióticas é uma etapa obrigatória durante o desenvolvimento de medicamentos. Uma variedade de métodos estão disponíveis para testar a sua eficiência, podem ser divididos em métodos de difusão e diluição. Os métodos de difusão em meios à base de ágar são abordagens bastante qualitativas, enquanto os métodos de diluição, comummente executados em placas de microtitulação de poliestireno, são frequentemente utilizados para determinar a concentração inibitória mínima (MIC) e a concentração inibitória mínima do biofilme (MBIC50) de forma quantitativa. Durante estes ensaios padronizados, as propriedades físicas do agente, por exemplo, as suas propriedades hidrofóbicas e instabilidade térmica, são frequentemente negligenciadas. Este estudo compara diferentes ensaios de difusão quanto à sua sensibilidade e ensaios de diluição melhorados em relação à sensibilidade térmica e ao carácter hidrofóbico dos antibióticos. Aplicámos o 1,8-cineol, um componente antibacteriano hidrofóbico dos óleos essenciais, no patogéneo Staphylococcus aureus e investigámos a influência do tempo de incubação, dos vasos de cultura celular e dos tensioactivos comummente empregados no ensaio. O estudo apresentado descreve um ensaio de difusão otimizado e um protocolo para a determinação exata da CIM e da MBIC50 de substâncias antibióticas hidrofóbicas termicamente instáveis. Os nossos ensaios podem ser facilmente executados, pois baseiam-se em medições de densidade ótica e coloração simples de cristal violeta. Concluímos que os rastreios preliminares de substâncias hidrofóbicas podem ser executados pelo método de difusão em poços. No entanto, para a determinação da CIM e da MBIC50 recomendamos vivamente a aplicação de tubos de vidro limpos e gravados em vez de placas de cultura celular de poliestireno. A utilização dos tensioativos Tween 80 ou Tween 20 foi considerada desnecessária e, além disso, falsificou os resultados. Em conjunto, as nossas técnicas padrão melhoradas podem ajudar a quantificar melhor o potencial antimicrobiano dos antibióticos hidrófobos, por exemplo, os óleos essenciais. Isto pode fornecer novas informações sobre o modo de ação e, além disso, permitir o desenvolvimento de novas substâncias antimicrobianas urgentemente necessárias para combater as resistências aos antibióticos comuns.