Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Identificação de Trichoderma spp. por código de barras de ADN e rastreio da actividade celulolítica

Abdelmegid I Fahmi, Ragaa A Eissa, Khalil A El-Halfawi, Hanafy A Hamza e Mahmoud S Helwa

Foi realizada a identificação de espécies de isolados de Trichoderma de diferentes locais do Delta do Nilo, no Egito, e comprovadas como as suas atividades celulolíticas. Com base nas características morfológicas, 75% dos isolados foram identificados ao nível de espécie e foram divididos em quatro grupos agregados. A caracterização morfológica por si só foi insuficiente para identificar com precisão as espécies de Trichoderma porque possuem relativamente poucos caracteres morfológicos e variação limitada que causam sobreposição e identificação incorreta dos isolados. Assim sendo, houve a necessidade de utilizar uma técnica molecular para compensar as limitações da caracterização morfológica. A sequenciação do DNA da região 5.8S-ITS foi realizada utilizando os primers específicos ITS1 e ITS4. Ao comparar as sequências da região 5.8S-ITS com as sequências depositadas no GenBank através do programa BLAST, todos os isolados podem ser identificados ao nível da espécie com uma percentagem de homologia de pelo menos 99%. Além disso, foi utilizada a ferramenta de pesquisa TrichOKEY para avaliar a fiabilidade do Genbank e os resultados ficaram em concordância de 92% com os resultados do BLAST. Os dados indicaram uma pequena diversidade de espécies e predominaram duas espécies principais, a saber; T. longibarchiatum e T. harzianum. A distribuição dos nucleótidos, bem como o conteúdo (G+C) na região ITS dos isolados, indicou uma vasta gama de variações de interesses. Por fim, os isolados foram avaliados quanto às suas atividades de celulase total através de um método de celulose-azul, para a atividade das exoglucanases através do método Avicel e para a atividade das endoglucanases através dos métodos de carboximetilcelulose (CMC) e celulose inchada com ácido . Consequentemente, foram seleccionados onze isolados para serem os melhores isolados de entre os 28 isolados utilizados para a capacidade celulolítica.