Jornal de Bacteriologia e Parasitologia

Abstrato

Identificação da especificidade de ligação dos ligantes NuoX e NuoY no complexo Campylobacter Jejuni I

Lirio I. Calderon-Gomez, Christopher J. Day, Lauren E. Hartley-Tassell, Jennifer C. Wilson, George L. Mendz e Victoria Korolik

Os componentes da bomba de prótons NADH:ubiquinona (Complexo I) da via respiratória foram identificados no genoma de C. jejuni. No entanto, os genes paradigma nuoE e nuoF que codificam subunidades do módulo NADH desidrogenase do Complexo I estão ausentes. Em vez disso, os genes cj1575c e cj1574c que codificam NuoX e NuoY estão presentes nos loci correspondentes a nuoE e nuoF, respectivamente. Análises de bioinformática mostraram a presença de homólogos de nuoX e nuoY em todas as cepas sequenciadas de C. jejuni e em outras espécies de Campylobacter, bem como a presença de ortólogos em outras É›-Proteobacteria. Para entender o envolvimento das proteínas NuoX e NuoY na respiração de C. jejuni e para caracterizar sua especificidade e afinidade de ligação de ligante, um arranjo de ciclo de ácido tricarboxílico foi desenvolvido como uma ferramenta para identificar proteínas que podem se ligar a intermediários deste ciclo, bem como outros metabólitos. Este arranjo mostrou que NuoX ligou FAD2+, e NuoY ligou FAD2+ e os doadores de elétrons malato e lactato. Estudos de Ressonância Magnética Nuclear de Diferença de Transferência de Saturação confirmaram os ligantes de ligação de NuoY e sugeriram que a fração flavina de FAD2+ interagiu mais fortemente com NuoY do que a fração adenina. Dados de afinidade gerados por Ressonância de Plasmon de Superfície indicaram que NuoY ligou-se a FAD2+ com um KD de 337 nM; NuoX e NuoY tinham uma afinidade para NADH de um KD de 403 nM e 478 nM, respectivamente, e uma afinidade dez vezes menor para NAD+ e FAD2+. Os dados sugeriram que o dinucletoide flavina-adenina poderia ser ligado preferencialmente ao NAD no Complexo I de C. jejuni.