Jornal de Pesquisa e Desenvolvimento em Aquicultura

Abstrato

Identificação e utilização eficiente de antibióticos para o desenvolvimento de um sistema de transformação estável em Porphyra yezoensis (Bangiales, Rhodophyta)

Megumu Takahashi, Koji Mikami, Hiroyuki Mizuta e Naotsune Saga

Apesar do desenvolvimento da expressão gênica transitória em espécies de algas vermelhas Porphyra, um sistema de transformação estável ainda não foi estabelecido nessas algas. Uma razão para a dificuldade na transformação é a falta de uma maneira de selecionar células transformadas das algas. Assim, para identificar antibióticos adequados para a seleção de células transformadas de forma estável, testamos o gametófito quanto à sensibilidade a 6 antibióticos, ampicilina (Am), canamicina (Km), higromicina (Hm), geneticina (G418), cloranfenicol (Cm) e paromomicina (Pm), que são frequentemente empregados como agentes de seleção na transformação de plantas terrestres e microalgas. Testes de sensibilidade, que foram realizados com diferentes concentrações (0-10 mg mL-1) de antibióticos, mostraram que Hm, G418, Cm e Pm exibiram um efeito letal em mais de 1,0 mg mL-1, sugerindo a adequação desses quatro antibióticos para a seleção de células geneticamente transformadas de gametófitos de P. yezoensis, enquanto os gametófitos de P. yezoensis foram altamente resistentes a Am e Km. Também conseguimos reduzir as concentrações de antibióticos diminuindo o valor do pH e a concentração de sal usando um meio sintético artificial. Aumentar a sensibilidade das células gametofíticas a Hm, G418, Cm e Pm no meio sintético modificado contribuirá para estabelecer um sistema de transformação genética em P. yezoensis.