Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Identificação e caracterização de moléculas com atividades antimicrobianas do epidídimo de coelhos utilizando uma abordagem proteómica

Reddy KVR, Sukanya Deva, Clara Aranha, Mandar S. Patgaonkar e Gauri Bhonde

Os péptidos antimicrobianos (AMPs) são os principais componentes do sistema imunitário do hospedeiro e especificamente a primeira linha de defesa do hospedeiro contra os agentes patogénicos invasores. No presente estudo procurou-se identificar e caracterizar AMPs que são sintetizados nas células epiteliais do epidídimo (EPECs) de coelho, Oryctologus cuniculus. A indução ex vivo de EPECs com o ligante TLR-9, CpG-ODN-2006 resultou numa sobre-regulação de vários AMPs. Estas moléculas foram identificadas nos extratos ácidos de homogenatos de tecido epididimal reunidos através de uma abordagem proteómica (Ultrafiltração, cromatografia de troca catiónica, RP-HPLC, Far Western blotting - FWB, 2D-PAGE e MALDI-TOF-MS). A fracção reunida de RP-HPLC (picos 1-5), denominada proteína antimicrobiana secretora do epidídimo de coelho (RESAMP), apresentou actividade contra vários agentes patogénicos. Os resultados de FWB, 2D-PAGE e MALDI-TOF-MS revelaram que das ~19 proteínas identificadas, quatro sequências proteicas (subunidades de hemoglobina-α/β, transtirretina e calreticulina) reagiram com antigénios do VIH (gp120, gp17, gp41, pág. Uma das quatro sequências (VLSHHFGKEFTPQVQ) apresentou >90% de homologia com a proteína hemohlobina-β. Peptídeo de 29 mer com sequência VLSHHFGKEFTPQVQ designado como hemoglobina beta do epidídimo de coelho (REHbβP). O peptídeo sintetizado apresentou a pontuação de Mowse mais elevada baseada na probabilidade (PBMS) e demonstrou uma boa atividade bactericida (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes e Candida albicans. O REHbβP não apresentou citotoxicidade contra células endocervicais humanas (End1/E6E7 ) e coelho Os resultados da imunofluorescência revelaram que o REHbβP está localizado nos estereocílios do epidídimo e no acrossoma dos espermatozóides ejaculados de coelho.