Jornal de Bioequivalência e Biodisponibilidade

Abstrato

Quantificação de hidroxocobalamina em plasma humano por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas em tandem por eletrospray em um estudo farmacocinético

Gustavo D. Mendes, Fabiana D. Mendes, Marinalva Ferreira Sampaio, Antonio Sergio Silveira, Lu Shi Chen, Khalid M. Alkharfy e Gilberto De Nucci

Um método rápido, sensível e específico para quantificar hidroxocobalamina em plasma humano usando paracetamol como padrão interno (IS) é descrito. O analito e o IS foram extraídos do plasma por extração líquido-líquido usando um solvente orgânico (etanol 100%; -20°C). Os extratos foram analisados ​​por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas em tandem por eletrospray (HPLC-MS-MS). A cromatografia foi realizada em coluna analítica Prevail C8 de 3 μm (2,1×100 mm id). O método teve um tempo de execução cromatográfica de 3,4 min e uma curva de calibração linear na faixa de 5-400 ng.mL-1 (r>0,9983). O limite de quantificação foi de 5 ng.mL-1. O método também foi validado sem o uso do padrão interno. A precisão na validação intra-lote com IS foi de 9,6%, 8,9%, 1,0% e 2,8%, enquanto sem IS foi de 9,2%, 8,2%, 1,8% e 1,5% para 5, 15, 80 e 320 ng/mL, respectivamente. A precisão na validação intra-lote com IS foi de 108,9%, 99,9%, 98,9% e 99,0%, enquanto sem IS foi de 101,1%, 99,3%, 97,5% e 92,5% para 5, 15, 80 e 320 ng/mL, respectivamente. A precisão na validação entre lotes com IS foi de 9,4%, 6,9%, 4,6% e 5,5%, enquanto sem IS foi de 10,9%, 6,4%, 5,0% e 6,2% para 5, 15, 80 e 320 ng/mL, respectivamente. A precisão na validação entre lotes com IS foi de 101,9%, 104,1%, 103,2% e 99,7%, enquanto sem IS foi de 94,4%, 101,2%, 101,6% e 96,0% para 5, 15, 80 e 320 ng/mL, respectivamente. Este procedimento HPLC-MS-MS foi usado para avaliar a farmacocinética da Hidroxocobalamina após injeção intramuscular de 5000 μg em voluntários saudáveis ​​de ambos os sexos (10 homens e 10 mulheres). Os voluntários apresentaram as seguintes características clínicas (de acordo com o sexo e expressas como média ± DP [intervalo]): homens: idade: 32,40 ± 8,00 anos [23,00-46,00], altura: 1,73 ± 0,07 m [1,62-1,85], peso corporal: 72,48 ± 10,22 kg [60,20-88,00]; mulheres: idade: 28,60 ± 9,54 anos [18,00-44,00], altura: 1,60 ± 0,05 m [1,54-1,70], peso corporal: 58,64 ± 6,09 kg [51,70-66,70]. Os seguintes parâmetros farmacocinéticos foram obtidos a partir das curvas de concentração plasmática de hidroxocobalamina vs. tempo: AUCúltimo, T1/2, Tmáx, Vd, Cl, Cmáx e Clast. Os parâmetros farmacocinéticos foram 120 (± 25) ng/mL para Cmáx, 2044 (± 641) ng.h/mL para AUCúltimo, 8 (± 3,2) ng.mL-1 para Clast, 38 (± 15,8) h para T1/2 e 2,5 (intervalo 1-6) h para Tmáx. As voluntárias apresentaram AUC significativamente menor (p=0,0136) (1706 ± 704 ng.h/mL) e maior (p=0,0205) depuração (2,91 ± 1,41 L/h), em comparação aos homens 2383 ± 343 ng.h/mL e 1,76 ± 0,23 L/h, respectivamente. Essas diferenças farmacocinéticas podem explicar a maior prevalência de deficiência de vitamina B12 em pacientes do sexo feminino . O método descrito validou bem sem o uso do padrão interno e essa abordagem deve ser investigada em outros métodos de HPLC-MS-MS.