Jornal de pesquisa e terapia com células-tronco

Abstrato

Crescimento e diferenciação de células estaminais da polpa dentária humana mantidas em soro bovino fetal, soro humano e meios de cultura isentos de soro/sem xeno

Rashi Khanna-Jain, Sari Vanhatupa, Annukka Vuorinen, George KB Sandor, Riitta Suuronen, Bettina Mannerstrom e Susanna Miettinen

Introdução: As células estaminais da polpa dentária (DPSCs) são uma fonte celular acessível e com aplicabilidade terapêutica na regeneração de tecidos danificados. As técnicas atuais para a expansão das DPSCs requerem a utilização de Soro Fetal Bovino (SFB). No entanto, os reagentes de origem animal apresentam problemas de segurança na terapêutica clínica. Ao expandir as DPSCs em meio isento de soro/xenolivre (SF/XF-M) ou em meio contendo soro humano (HS-M), os problemas podem ser eliminados. Assim sendo, o objetivo do nosso estudo foi identificar alternativas adequadas de meios de cultura celular para as DPSCs.

Métodos: Foram estudados o isolamento, proliferação, morfologia, marcadores de superfície celular (CD29, CD44, CD90,
CD105, CD31, CD45 e CD146), expressão de marcadores stemness (Oct3/4, Sox2, Nanog e SSEA-4) e multilinhagem in vitro.

Resultados : Os DPSCs expressaram os marcadores de superfície celular e stemness em todas as condições estudadas. A análise de proliferação das células cultivadas em diferentes concentrações de HS revelou que as células isoladas em 20% de HS-M e passadas em 10% ou 15% de HS-M suportaram o crescimento celular. O isolamento direto das células em SF/XF-M não suportou a proliferação celular. Assim sendo, as células cultivadas em 20% de HS-M foram utilizadas para estudos adicionais de SF/XF-M. No entanto, a proliferação das DPSCs foi significativamente menor em SF/XF-M quando comparada com as células cultivadas em SFB-M e HS-M. Além disso, a proliferação de DPSCs em SF/XF-M poderia ser aumentada pela adição de 1% de HS em meio de cultura celular. Verificaram-se diferenças na eficácia da diferenciação osteogénica, condrogénica e adipogénica entre as células cultivadas em meios de diferenciação FBS, HS e SF/XF. Foi observada uma diferenciação adipogénica e osteogénica mais pronunciada no meio de diferenciação HS, no entanto, em células cultivadas com FBS-M foi detectada uma diferenciação condrogénica mais eficaz.

Conclusões: Os nossos resultados indicam que o HS é uma alternativa adequada ao FBS para a expansão das DPSCs. A composição do SF/XF-M necessita de ser ainda mais otimizada em termos de expansibilidade celular e eficiência de diferenciação para se conseguir aplicabilidade clínica.