Biologia Unicelular

Abstrato

Expressão genética em células isoladas da linhagem de células de câncer de próstata CWR-R1 e tecido de próstata humano com base no fenótipo da população lateral

Kalyan J Gangavarapu, Austin Miller e Wendy J Huss

Definir sinais biológicos no nível de célula única pode identificar mutações de driver iniciadoras de câncer. Técnicas para isolar células únicas, como sistemas de classificação por microfluídica e captura magnética, têm limitações como: alto custo, trabalho intenso e a exigência de um grande número de células. Portanto, o objetivo do nosso estudo atual é identificar uma técnica eficaz em termos de custo e trabalho, confiável e reprodutível que permita o isolamento de células únicas para análise para promover o uso regular em laboratório, incluindo PCR de transcrição reversa padrão (RT-PCR).

No estudo atual, utilizamos células de próstata isoladas da linhagem de células de câncer de próstata CWR-R1 e espécimes clínicos de próstata humana, com base no ensaio de população lateral do transportador de cassete de ligação de ATP (ABC) efluxo do ciclo de corante violeta (DCV). Expressão de quatro genes: ABCG2; Aldeído desidrogenase1A1 (ALDH1A1); receptor de andrógeno (AR); e marcador de células-tronco embrionárias, Oct-4, foram determinados.

Os resultados do estudo atual na linhagem celular CWR-R1 mostraram a expressão dos genes ABCG2 e ALDH1A1 em 67% das células da população de um único lado e em 17% ou 100% das células da população não lateral, respectivamente. Estudos usando células únicas isoladas de espécimes clínicos mostraram que o gene Oct-4 é detectado em apenas 22% das células da população de um único lado e em 78% das células da população não lateral. Enquanto isso, a expressão do gene AR está em 100% das células da população de um único lado e da população não lateral isoladas do mesmo espécime clínico de próstata humana.

Esses estudos mostram que realizar RT-PCR em células únicas isoladas por FACS pode ser conduzido com sucesso para determinar a expressão gênica em células únicas de linhas celulares e tecido digerido enzimaticamente. Enquanto esses estudos fornecem uma leitura de expressão sim/não simples, o RT-PCR quantitativo mais sensível seria capaz de fornecer ainda mais informações, se necessário.