Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Expressão de uma sequência de papaína de Carica papaya otimizada por códon na levedura metilotrófica Pichia pastoris

Nicole Werner, Thomas Hirth, Steffen Rupp e Susanne Zibek

A cisteína endoprotease papaína é uma das proteases vegetais mais utilizadas para aplicações industriais. Mas o isolamento tradicional da papaína do látex das plantas de papaia não consegue abranger o mundo inteiro? exigência. Para aumentar a produção de papaína para aplicações industriais, têm sido estudados nos últimos anos diversos sistemas de expressão para a sua produção recombinante. Embora a expressão em Eschericha coli tenha resultado na acumulação de proteína insolúvel, a expressão no sistema baculovírus/inseto e em Saccharomyes cerevisiae resultou em baixos rendimentos de proteína solúvel, inadequada para a produção em larga escala. Aqui descrevemos a expressão heteróloga de uma sequência de propapaína sintética otimizada por códon nas estirpes de Pichia pastoris X33 (Mut+) e KM71H (Muts). A propapaína recombinante poderia ser expressa como proteína solúvel e secretada para o meio de cultura através do péptido sinal do factor α. As maiores atividades foram obtidas na estirpe Muts quando cultivada em meio complexo. Após purificação por cromatografia Ni-NTA, foram obtidos 463 mg/L de propapaína recombinante comparáveis ​​aos maiores rendimentos de propapaína relatados até agora em E. coli após solubilização e redobramento da proteína e com uma atividade específica semelhante a uma papaína comercial de látex de mamão.