Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Expressão e purificação de alfa interferão humano fundido com SAK em Escherichia coli

Shardul Salunkhe, Bhaskarjyoti Prasad, Ketaki Sabnis-Prasad, Anjali Apte-Deshpande e Sriram Padmanabhan

Um m�odo para melhor redobramento e purifica�o de interfer� humano derivado de E. coli -? (rhIFN ?2b) de corpos de inclus� como uma prote�a de fus� de Estafiloquinase (SAK). Tal proteína de fusão não necessitou de suplementação de códons raros para expressão e foi considerada estável a 37°C. As condições óptimas de redobramento envolveram a utilização de um agente desnaturante suave sem a necessidade de quaisquer outros agentes para prevenir a agregação. A prote�a de fus� SAKrhIFN ?2b foi purificada com sucesso utilizando dois passos de purifica�o e foi clivada utilizando enteroquinase em dois fragmentos nomeadamente SAK e IFN. Verificou-se que ambas as proteínas eram biologicamente activas, apresentando um enrolamento adequado de ambos os parceiros de fusão. O IFN clivado apresentou um tempo de retenção semelhante em RP-HPLC como o IFN purificado não marcado derivado de bactérias, bem como um peso molecular semelhante no Agilent 2100 Bioanalyzer, indicando o processamento correto do IFN após clivagem por enteroquinase. Os níveis de expressão de SAK-IFN foram duas vezes superiores aos observados com IFN não marcado em condições experimentais semelhantes.