Jornal de pesquisa e terapia com células-tronco

Abstrato

Avaliação do Meio de Cultura para Queratinócitos Humanos

Fabiana Regina Xavier Batista, Jussara Rehder e Maria Beatriz Puzzi

Os queratinócitos humanos são necessários para a engenharia de tecidos cutâneos aplicada na reparação e regeneração de tecidos visando a aplicação clínica. A necessidade de ter concentrações celulares elevadas num curto espaço de tempo quando se realiza a proliferação celular é vital. O crescimento e a manutenção destas células envolvem comummente a utilização do meio MCDB 153, que é suplementado com componentes de origem animal, como os fatores de crescimento e o soro fetal bovino (SFB). O objetivo deste trabalho foi avaliar diferentes formulações baseadas no meio MCDB 153 para a proliferação de queratinócitos. Para isso, foram realizadas várias experiências para definir quais os suplementos importantes para o cultivo das células da pele utilizando o planeamento fatorial 24. Foram obtidas amostras de pele de quatro doentes submetidos a dermolipectomia, operação de cirurgia plástica. Estes fragmentos foram tratados com tripsina-EDTA a 0,25% durante quatro horas, a 37ºC. Além disso, a epiderme foi separada da derme, fornecendo células da pele. As culturas em lote foram realizadas em placas de 6 e 96 poços, para além de frascos de 25 cm2. Os resultados relativos ao crescimento e metabolismo celular mostraram que os queratinócitos cresceram plenamente em meio MCDB 153 contendo insulina (7,5 µg.mL-1), extrato de hipófise bovina-BPE (80 µg.mL-1), fator de crescimento epidérmico -EGF (0,08 µg .mL-1), hidrocortisona (0,63 µg.mL-1) e glutamina (1 gL-1). Por outro lado, os meios de cultura propostos no desenho experimental não resultaram num crescimento celular satisfatório. Além disso, embora a concentração inicial de glicose tenha sido baixa na maioria dos casos, o lactato foi fortemente produzido pelas células atingindo 1 gL-1.