Genética hereditária: pesquisas atuais

Abstrato

Avaliação da terapia génica mediada por AAV com volume vetorial reduzido em ratinhos knockout Cngb3, um modelo de acromatopsia

Liu X, Zhang Y, Du W, Shi W, Tao Y, Deng W, Li J, Zhao C, Pang J

Objectivo: Este estudo foi desenhado para investigar se o volume de vector utilizado para a injecção sub-retiniana pode ser reduzido para transfectar retina inteira de ratinho C57bl/6J e se pode restaurar a função do cone num modelo de ratinho knockout para Cngb3 (KO) .
Métodos: Os ratinhos C57bl/6J e os ratinhos Cngb3 KO receberam uma injeção sub-retiniana de 0,5 μL ou 1 μL do vetor AAV5-smCBAmCherry e do vetor AAV5-IRBP/GNAT2-hCngb3, respetivamente. Montagens inteiras de retina e secções congeladas foram preparadas a partir de olhos de ratinho de tipo selvagem para avaliar a área transfectada. Os eletrorretinogramas (ERGs) adaptados ao escuro e à luz foram registados dois meses após a injeção do vetor nos olhos dos ratinhos Cngb3 KO.
Resultado: Na retina de ratinhos de tipo selvagem injetados com AAV5-smCBA-mCherry, não foi observada qualquer diferença entre os volumes de injeção. Foram observadas células epiteliais pigmentares da retina (RPE) e fotorreceptoras mCherry positivas em toda a retina. Em ratinhos Cngb3 KO injetados com AAV5-IRBP / GNAT2-hCngb3, os ratinhos injetados com 1 μL apresentaram uma média mais elevada de restauração fotópica de ERG do que os ratinhos injetados com 0,5 μL. No entanto, os ERG escotópicos foram mais baixos nos ratinhos injetados com 1 μL, indicando que maiores volumes de injeção resultaram em mais danos.
Conclusão: O volume reduzido (0,5 μL) do vetor induziu menos danos. No entanto, doses mais elevadas de vetor (1 μL) restauram uma função ERG mais elevada nos ratinhos Cngb3 KO.