Tecnologia Genética

Abstrato

Fatores endógenos causadores de danos espontâneos no ADN que levam à integração aleatória em células humanas

Haruna Kamekawa, Aya Kurosawa, Masumi Umehara, Eriko Toyoda e Noritaka Adachi

A integração aleatória é um fenómeno no qual as moléculas de ADN transfectadas se integram (locais aleatórios do) genoma do hospedeiro através de recombinação não homóloga. Embora se presuma que a reparação de quebras de cadeia dupla de ADN conduza a eventos de integração aleatórios, a forma como estas lesões endógenas de ADN são geradas em células vivas é pouco compreendida. Neste estudo, apresentamos evidências de que a DNA topoisomerase IIa (Top2α) e as espécies reativas de oxigénio (ROS) são responsáveis ​​por causar danos no ADN genómico que levam à integração aleatória. Especificamente, empregámos uma linha celular de linfócitos pré-B humanos para examinar os efeitos dos níveis de expressão celular de Top2 e das concentrações de oxigénio durante a cultura celular. Verificámos que o tratamento das células com siRNA Top2α reduz significativamente a frequência de integração aleatória, enquanto a ausência de Top2β teve pouco ou nenhum impacto. Mostrámos também que as células cultivadas continuamente em condições de cultura de baixo oxigénio (3%) após a exibição da eletroporação reduziram a frequência de integração aleatória em comparação com as condições normais de oxigénio (21%). Estas descobertas apoiam a noção de que a proteína Top2α e as ERO são factores endógenos que podem produzir danos no ADN, levando à integração aleatória do ADN transfectado em células humanas.