Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Aspergillus fumigatus L-Aminoácido Oxidase - Purificação e Caracterização da Enzima em Duas Etapas

Susmita Singh, Binod Kumar Gogoi e Rajib Lochan Bezbaruah

A L-aminoácido oxidase (L-aao) obtida a partir de Aspergillus fumigatus foi purificada por cromatografias de troca iónica e filtração em gel. O rendimento de L-aao na cromatografia de troca iónica foi de 24,40% enquanto que a recuperação de L-aao purificada por filtração em gel foi de 18,70% da enzima bruta. A massa molecular da enzima purificada foi estimada em 55 kDa por SDS PAGE e 93 kDa por filtração em gel. A enzima foi estável até aos 40ºC e numa ampla gama de pH de 5,6-9,2. A enzima tem maior especificidade para os L-aminoácidos aromáticos hidrofóbicos, nomeadamente a tirosina e a fenilalanina. Os parâmetros cinéticos Km e Vmax foram determinados como 43,47 mM e 0,0434 μmol/min/mL respetivamente. Dez mM de ácido benzóico e EDTA inibiram completamente a enzima, enquanto que se observou uma inibição mínima com glicina (29,56%) e α-naftol (12,4%). A riboflavina, a azida sódica e a 8-hidroxiquinolina inibem a enzima até 44,89%, 49,63% e 70,07%, respetivamente. O MgSO4 a 10-4 M e 10-3 M aumentou a atividade da enzima em 1,72 e 2,22 vezes, respetivamente, enquanto o CuSO4 a 10-3 M aumentou a atividade em 1,65 vezes. Este é o primeiro relato de purificação de L-aao de Aspergillus fumigatus.