Pharmaceutica Analytica Acta

Abstrato

Dinâmica da ligação HSP60-Cypd estudada com ressonância de plasmon de superfície

Ekaterina A Korobkova

Objetivos: A ligação da chaperonina HSP60 à ciclofilina D (CypD) representa uma via oncogênica que impede que as mitocôndrias passem pela abertura do poro de transição de permeabilidade (PTP). Assim, a HSP60 pode ser considerada um alvo atraente para o design de inibidores químicos. A complexidade da estrutura da HSP60 impede o uso de métodos de triagem padrão. O presente estudo teve como objetivo analisar a dinâmica das interações da CypD com diferentes domínios da HSP60. Método: A tecnologia de ressonância plasmônica de superfície (SPR) foi empregada. Anticorpos que mapeiam várias regiões da HSP60 foram imobilizados em um chip biossensor CM5 usando química de acoplamento amino. A HSP60 foi anexada a vários anticorpos no chip, resultando em diferentes orientações da proteína, e a cinética de sua ligação à HSP60 foi analisada. Resultados: As constantes de taxa de dissociação para interações HSP60-CypD variaram entre 5,5 × 10-4 s-1 e 16 × 10-4 s-1. As constantes de equilíbrio de dissociação variaram de 15,8 nM a 43,5 nM. Um anticorpo reconhecendo uma região entre os resíduos 50 e 100 no domínio equatorial de HSP60 impediu sua associação com CypD. Conclusão: A tecnologia SPR provou ser bem-sucedida na análise das interações entre as subunidades CypD e HSP60. A força de ligação foi comparável à de uma ligação anticorpo-antígeno relativamente forte. A ligação preferencial de CypD a um domínio específico dentro da subunidade HSP60 sugere a possibilidade de projetar um antagonista molecular.