Jornal de pesquisa e terapia com células-tronco

Abstrato

A duplicação de TBK1 estimula a autofagia em células retinianas derivadas de iPSC de um doente com glaucoma de tensão normal

Budd A Tucker, Frances Solivan-Timpe, Ben R Roos, Kristin R Anfinson, Alan L Robin, Luke A Wiley, Robert F Mullins e John H Fingert

A duplicação do gene TBK1 causa glaucoma de tensão normal (GTN); no entanto, o mecanismo pelo qual esta variação do número de cópias leva à morte das células ganglionares da retina é pouco compreendido. A capacidade de utilizar células estaminais pluripotentes induzidas derivadas da pele (iPSCs) para investigar a função ou disfunção de um produto genético mutante em tecidos inacessíveis, como a retina, fornece-nos agora a capacidade de interrogar a fisiopatologia da doença in vitro. As iPSCs foram geradas a partir de fibroblastos dérmicos obtidos de um doente com NTG associado a TBK1, via transdução viral dos fatores de transcrição OCT4, SOX2, KLF4 e c-MYC. As células progenitoras da retina e os subsequentes neurónios semelhantes a células ganglionares da retina foram derivadas utilizando o nosso protocolo de diferenciação gradual desenvolvido anteriormente. A diferenciação com células semelhantes a gânglios da retina foi demonstrada através de rt-PCR dirigido contra TUJ1, MAP2, THY1, NF200 e ATOH7 e imunohistoquímica dirigida contra NF200 e ATOH7. A análise de Western blot demonstrou que tanto os fibroblastos como os neurónios semelhantes às células ganglionares da retina derivados de doentes com NTG com duplicação do gene TBK1 aumentaram os níveis da proteína LC3-II (um marcador chave da autofagia). Foi demonstrado anteriormente que a duplicação de TBK1 aumenta a expressão de TBK1 e aqui demonstramos que a mesma duplicação leva à ativação de LC3-II. Isto sugere que o glaucoma associado ao TBK1 pode ser causado pela desregulação (sobreativação) desta via catabólica.