Bioquímica e Bioquímica Analítica

Abstrato

Danos no ADN de cadeia dupla avaliados com espectroscopia Raman

Auner AW e Thomas JC

As quebras de ADN de dupla cadeia [DSBs] e as reparações subsequentes podem corrigir danos no ADN ou causar erroneamente mutações que levam a danos celulares e doenças. As DSB podem ser medidas com espectroscopia Raman , utilizando luz dispersa inelástica resultante de vibrações moleculares distintas de amostras de ADN purificadas. Com um tempo de exposição de 20 s e 2 acumulações, a análise Raman descobriu que as vibrações circulares do ADN do plasmídeo pBS KS+ eram semelhantes ao controlo em branco de água. A restrição do sítio EcoR1 único do pBS KS+ criou ADN linear e aumentos significativos dos picos Raman a 880, 1044, 1084 e 1458 cm ^-1 . Para explorar ainda mais a deteção Raman de danos no ADN, os linfócitos Jurkat humanos foram cultivados em +/- 16 μg/ml de Bleocin™. O ADN das células tratadas com Bleocin ^™ demonstrou uma absorção Raman melhorada a 880, 1044, 1084 e 1458 cm ^-1 versus células não tratadas. As células Jurkat são deficientes na capacidade de expressar a proteína Bax pró-apoptótica e p53, mas a exposição a Bleocin ^™ aumentou os níveis de TAp73 e subsequentemente a morte celular. Devido à baixa interferência nos materiais biológicos e à elevada sensibilidade, a espectroscopia Raman é um método rápido e simples para estimar comparativamente a extensão dos DSBs relativos. Ao contrário dos ensaios cometas, que requerem a análise de células vivas e moribundas, o ADN isolado pode ser facilmente recuperado de praticamente qualquer célula, armazenado e a análise DSB feita posteriormente.